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lunatuning
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76 Messaggi |
 Inserito il - 07 settembre 2009 : 16:59:18
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ciao! ho già chiesto aiuto per un esercizio ma ora devo chiedervi una mano per altri due esercizi....
1.
Per l’isolamento della proteina inibitrice IF1 si è seguito in laboratorio un protocollo che ha consentito di precipitare IF1 dall’ultimo sovranatante della precipitazione in ammonio solfato di F1. Si spieghi:
a. come viene precipitata IF1;
b. per quale scopo il campione di IF1 viene sottoposto a dialisi chiarendo i meccanismi del processo.
Dopo che il campione di IF1 è stato concentrato a 8,7 mg/ml si vuole valutare la qualità della purificazione ottenuta mediante SDS-PAGE. Si calcolino e si riportino in tabella i microl di proteina, buffer di sospensione e sample buffer 3x per preparare tre campioni da caricare su gel contenenti rispettivamente 8microg, 16microg e 24microg considerando che il volume finale dei campioni deve essere di 21microl (se i volumi da prelevare sono inferiori a 1microl ricorrere ad una opportuna diluizione del campione e indicarla in tabella).
2.Si vuole mettere a punto un protocollo di purificazione della proteina B da una miscela di cinque proteine. Definite e spiegate le fasi successive che consentano la purificazione della proteina B, tenendo conto delle seguenti caratteristiche delle proteine costituenti la miscela:
PROTEINA A : PM 54000 % taglio con (NH4)2SO4 : 50 - 60%
PROTEINA B : PM 53500 % taglio con (NH4)2SO4 : 20 - 30%
PROTEINA C : PM 14000 % taglio con (NH4)2SO4 : 20 - 40%
PROTEINA D : PM 7000 % taglio con (NH4)2SO4 : 25 - 40%
PROTEINA E : PM 6500 % taglio con (NH4)2SO4 : 45 - 55%
come faccio?!?!
grazie mille!!! 
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