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Daniele430
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 Inserito il - 17 aprile 2015 : 11:14:48
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Salve ragazzi vorrei chiedervi una informazione anche se sembrerà stupida come domanda. Premesso che ho delle cellule che esprimono il recettore androgeno, ora dovrei sottoporle a una serie di trattamenti e poi fare delle real time.
Vorrei effettuare delle curve standard & efficienza per il gene AR ed altri.
La mia domanda è la seguente per effettuare la curva utilizzo mRNA retrotrascritto di cellule non trattate con l'ormone endogeno? Oppure utilizzo l'mRNA retrotrascritto delle cellule trattate con l'ormone endogeno? o entrambe?
grazie
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Ftoresearch
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Inserito il - 12 maggio 2015 : 15:24:55
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| Ciao, hai risolto il tuo problema?Volevo chiederti, come fai a costruire la curva standard?O meglio, come calcoli le copie di DNA da mettere in relazione con il Cq?Grazie |
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Daniele430
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6 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2015 : 14:27:00
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| Ciao nessuno mi ha risposto così mi sono messo a studiare. Per risponderti se devi fare una semi-quantitativa la curva standard è praticamente inutile, infatti procedi con la PCR e successivamente normalizzi con il gene housekeeping che hai deciso di utilizzare. Al contrario se devi fare una quantitativa devi assolutamente fare una curva che ti costruisci sapendo esattamente la conc che hai dentro i tuoi standard. |
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Ftoresearch
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Inserito il - 22 maggio 2015 : 12:36:31
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| Si, ma come fai a sapere la concentrazione esatta dei tuoi standard?Fai una quantificazione dell'assorbanza a 260 nm?Che poi se non sbaglio, occorre conoscere le copie/microlitro, valore che appunto non ho capito come calcolare, visto che una misura spettrofotometrica ti da solamente un valore di concentrazione del tipo ng/microlitro. |
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Daniele430
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Ftoresearch
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Inserito il - 25 maggio 2015 : 09:00:53
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| Va bene, grazie. |
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Curva Standard & Efficienza 
Didattica
