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gianpierolandolfi
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 Inserito il - 14 aprile 2008 : 16:10:40
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il professore di genetica in una delle sue slide ha detto quanto segue:
"Mappatura di mutazioni puntiformi
Effettuati tentativi per utilizzare il trasposone endogeno Tc, opportunamente
modificato, come vettore di mutagenesi (come lo è l’elemento trasponibile P per
la Drosophila) ma l’elevato numero di trasposoni della stessa famiglia ritrovati
nei ceppi utilizzati nei laboratori rende la tecnica estremamente problematica e
laboriosa. Sono in corso tentativi di introdurre e mobilizzare nel genoma di
C.elegans un trasposone della famiglia marriner identificato in Drosophila.
L’induzione di mutazioni mediante EMS rimane ancora oggi in C.elegans la
tecnica più efficace.
La mappatura delle mutazioni puntiformi viene realizzata attraverso la
valutazione della frequenza di ricombinazione con marcatori visibili
permettendo di valutare non solo l’associazione ad un particolare cromosoma
ma anche di restringere la regione cromosomica in cui la nuova mutazione
indotta risiede.
Allo scopo di rendere possibile una mappatura per ricombinazione più raffinata
e precisa si è proceduto alla ricerca di polimorfismi a singolo nucleotide (SNPs:
sostituzioni, singole inserzioni e delezioni; alcuni sono RFLPs) confontando il
ceppo di laboratorio di riferimento (isolato N2 di Bristol) e un isolato delle isole
Haway.Uno studio pilota condotto su circa 6,4 Mb (cqa il 6-7% del genoma
totale) ha rivelato una densità media di circa 1SNPs/800-1000bp."
Ora io non ho capito quanto segue:
1)io incrocio i ceppi di laboratorio con la mia mutazione con ceppi delle
Haway. ottengo individui eterozigoti in cui avviene ricombinazione. Ma non ho capito come fanno a trovare i nuovi SNPs
2) Ma alla fine per identificare una mutazione in un locus usando uno SNPs come fanno? Utilizzano dei primer fincheggianti uno SNPs che e' unico per quella regione poi vanno ad amplificare e vializare su gel o a sequenziare?
Vi ringrazio delle risposte.
Buona giornata :)
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