Southern Blot per patologie da espansione di triplette

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dalila810
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2015 : 07:31:32

Ciao a tutti, domani ho l'esame di ingegneria genetica e genetica molecolare e ho questa lacuna che non riesco a risolvere in nessun modo. spero possiate aiutarmi

il mio prof mi ha detto che quando abbiamo patologie da espansioni di triplette per identificarle i due approcci sono o PCR o southern blot. la PCR mi è chiara, quello che non mi è chiaro è il southern.

prima di tutto l'enzima di restrizione utilizzato lavora in condizioni subottimali? il sito di restrizione in corrispondenza del quale l'enzima taglia corrisponde alla tripletta ripetuta (anche se so che i siti di restrizioni possono avere dimensione di 4, 6 o pb)?
la sonda che si utilizza su cosa è disegnata, sulle triplette?

vi prego datemi quanti più dettagli possibili!!!
grazie!

GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2015 : 19:21:34

Citazione:
Messaggio inserito da dalila810

il sito di restrizione in corrispondenza del quale l'enzima taglia corrisponde alla tripletta ripetuta (anche se so che i siti di restrizioni possono avere dimensione di 4, 6 o pb)?

Ovviamente no, se non ti taglierebbe le triplette e non potresti vedere una differenza di peso in base al numero di ripetizioni.

Citazione:
Messaggio inserito da dalila810

la sonda che si utilizza su cosa è disegnata, sulle triplette?

su una regione "vicina" alle triplette, e può anche comprendere la tripletta.

Questo è uno schema di PCR e Southern: