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Dr Lopez
Utente Junior
141 Messaggi |
 Inserito il - 09 luglio 2012 : 11:40:36
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Ciao ragazzi! Allora sarei molto grato a chiunque possa darmi un chiarimento in merito al sequenziamento chimico... Dunque ho preso le quattro aliquote del DNA a singolo filamento marcato radioattivamente all'estremitā 5' e le ho poste nelle quattro differenti provette contenenti ciascuna piperidina + DMS o idrazina. Ma a questo punto, come cavolo faccio a essere certo che il DNA non venga tagliato sempre nel medesimo punto?? Mi spiego meglio... Facendo conto che la sequenza da scoprire sia CGATGATCCGTT, e ponendo l'attenzione sulla provetta in cui il DNA č tagliato in corrispondenza di G, nei libri si dice che troverō un frammento CGATGATCC, quello successivo CGAT, e quello successivo ancora C. Ma come faccio a essere sicuro di non ottenere solo frammenti CGATGATCC??? o solo CGAT??? Spero di essere stato chiaro... grazie mille...
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2012 : 11:59:20
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| Per una semplice ragione statistica. Hai miliardi di molecolare, non ha sensp supporre che il taglio avvenga in un solo punto. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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Dr Lopez
Utente Junior
141 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2012 : 12:04:37
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| Anche nel libro parlava di una questione statistica, ma non mi convinceva molto... Scusa approfitto della tua gentilezza per chiederti un altro piccolo chiarimento... Ma in ognuna delle 4 provette quindi ho tantissime copie del DNA iniziale marcato da sequenziare, giusto?? |
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2012 : 12:14:56
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| Certo, d'altronde considera che siamo in ambito chimico. Anche se avessi una picomole di DNA, concentrazione molto bassa citata per estremizzare, avresti comunque 6x10^11 molecole di DNA, ossia oltre 100 miliardi di molecole. Tieni inoltre in considerazione che č possibile regolare la quantitā di reagenti ed il tempo della reazione, di modo da incrementare le probabilitā di rottura. D'altra parte non bisogna esagerare: si deve fare in modo di ottenere una sola rottura per molecola per poter effettuare il sequenziamento. |
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Dr Lopez
Utente Junior
141 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2012 : 12:21:10
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| Ti ringrazio molto... Sono solo all'inizio del mio percorso e molte cose sono ancora oscure per me... Grazi mille della disponibilitā, buona giornata :) |
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2012 : 13:22:33
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Figurati, alcuni punti di vista si acquisiscono con il tempo e l'esperienza. Ci arriverai.
Buona giornata anche a te
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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Marshepherd
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 28 aprile 2014 : 23:29:53
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Ciao, scusate, ma come faccio a ottenere un filamento singolo marcato?
se parto da un duplex, e marco l'estremitā 5', poi denaturo la molecola per ottenere due filamenti singoli, ma come sono sicuro che nelle provette uso solo uno dei due filamenti? |
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