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Valentina24424
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
 Inserito il - 10 gennaio 2009 : 19:05:57
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Ciao,
vi prego aiutatemi a risolvere questa confusione che ho riguardo al calcolo di Vmax e Km usando l'equazione di Michaelis e Menten.
Ho questi dati sperimentali e devo calcolare Vmax e Km di un enzima in assenza e presenza di inibitore:
..[S](M)....V0senza-inib...V0con-inibit.
0,3X10^-5........10,4.............4,1
0,5X10^-5........14.5.............6,4
1,0X10^-5........22.5.............11,3
3,3X10^-5........33,8.............22,6
9,3X10^-5........40,5.............33,8
unità di misura V0= micromoli/min
unità di misura [S]=M
Adesso dovrei considerare i reciproci dei suddetti valori e metterli sugli assi cartesiani per ottenere una retta che mi segna Vmax e Km(metodo dei doppi reciproci).
Ma la mia domanda è:
COME FACCIO A METTERE QUESTI NUMERI CON QUESTI VALORI?CI VORREBBE UN FOGLIO GRANDE QUANTO UNA PIAZZA.
Quindi ho pensato, come alcuni fanno, di risolvere il problema usando un semplice sistema di due equazioni così da trovarmi Km e Vmax.
Posso scegliere due punti a caso dato che, se non sbaglio, il risultato dovrebbe essere lo stesso. Quindi, dai dati sperimentali sopra riportati scelgo:
[S]=3,3X10^-5; V0=33,8
[S]=9,3X10^-5; V0=40,5
e imposto il mio sistema calcolando Vmax e Km senza inibitore:
l'eq.di Michaelis e Menten è:
V0=(Vmax[S])/(Km+[S]
quindi il mio sistema sarà:
33,8=(Vmax0,000033)/Km + 0,000033
40,5=(Vmax0,000093)/(Km + 0,000093)
Risolvendo il sistema trovo che Vmax e Km sono:
Km= 0,00001
Vmax= 45,4
Io pensavo di potermi fidare di questi valori trovati con questo metodo e per curiosità ho provato a vedere se prendendo altri due punti di riferimento e impostando il sistema mi dava gli stessi valori.
MA NON E' COSI'. Alcune volte Vmax è più e altre meno di 45,4 e lo stesso vale per Km. I valori sono simili ma non precisi e non corrispondono. Se poi devo calcolare Vmax e Km con la presenza di un inibitore è un casino capire di che tipo di inibizione si tratta.
Esempio ho calcolato VmaX E Km usando questi valori in presenza di inibitore:
[S]=3,3X10^-5; V0=22,6
[S]=9,3X10^-5; V0=33,8
e Vmax e Km mi sono venuti:
Vmax= 46,47
Km= 0,00003
IO POSSO CAPIRE CHE VMAX DIMINUISCA, MA NON CHE ADDIRITTURA AUMENTI IN PRESENZA DI INIBITORE.
Perfavore aiutooo, che cosa sbaglio?Eppure le equazioni sono giuste perchè ho fatto la verifica.
1)E' GIUSTO IL METODO DI IMPOSTARE UN SISTEMA DI 2 EQUAZIONI PRENDENDO DUE COPPIE DI VALORI [S]e V0 A CASO PER TROVARE KM E VMAX?
2)SE NON POSSO USARE IL METODO DEI DOPPI RECIPROCI A CAUSA DI NUMERI TROPPO GRANDI O TROPPO PICCOLI, COME NEL MIO CASO, COME POSSO FARE PER TROVARE QUESTA BENEDETTA KM E VMAX?
VI PREGOOOOOOOO AIUTATEMIII :(
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twister
Nuovo Arrivato
Prov.: RN
Città: Riccione
19 Messaggi |
Inserito il - 10 gennaio 2009 : 19:20:13
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nn so se tu puoi fare in questo modo, ma con Excel è facilissimo se puoi usare Excel fammi sapere ke ti spiego come fare |
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Valentina24424
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 10 gennaio 2009 : 19:55:55
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Si, te ne sarei molto grata
Cmq stavo cercando un metodo perchè tra breve ho l'esame di biochimica e tra gli esercizi per ripassare c'era anche questo con questi numeri molto piccoli e mi sono chiesta "come faccio se all'esame c'è un problema del genere a impostare valori così piccoli e allo stesso tempo valori molto più grandi.
Cmq se mi spiegassi come fare in excelle sarebbe qualcosa in più, almeno potrei fare delle prove....
grazie milleeeeee |
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twister
Nuovo Arrivato
Prov.: RN
Città: Riccione
19 Messaggi |
Inserito il - 10 gennaio 2009 : 20:34:50
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allora..in excel fai cosi..scrivi in colonna in diverse celle i valori di [S] e nelle celle vicino i valori di V0..ora posizionati in una cella vuota e in alto clicca su Inserisci --> Funzione
ora, tra le funzini statistiche, cerca la funzione INTERCETTA, selezionala e clicca su OK. nella casella "Y_nota" devi inserire le celle in cui ci sono i valori ke andranno sull'asse delle y (nel tuo caso, i valori di V0)..per selezionare le celle, basta ke clicchi col mouse sul simbolino vicino all'uguale e selezioni, tenendo premuto il tasto sinistro del mouse, le celle ke ti interessa..ora fai la stessa cosa con la cella "X_nota", selezionando le caselle in cui ci sono i valori di [S]..poi clicca su OK..il valore ke ti riporta questa funzione è l'intercetta, appunto, cioè il punto in cui la tua retta tocca l'asse delle y (nel tuo caso, è il reciproco di V Max)..basta, quindi, ke fai il reciproco di quel valore per ottenere la tua V Max..x trovare, invece, il punto in cui la retta tocca l'asse delle x, usi sempre la funzione INTERCETTA, xò nella casella "Y_nota" inserisci le celle coi valori si [S] (quelli ke andrebbero sull'asse delle x) e nella casella "X_nota" inserisci le celle coi valori di V0..facendo il reciproco di qst nuovo valore trovi la Km
se nn hai capito qualcosa kiedi pure, sarò lieto di spiegartelo |
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Valentina24424
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 11 gennaio 2009 : 21:48:45
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E se all'esame convertissi le moli in micromoli per esempio?
Avendo questi dati:
..[S](M)....V0senza-inibitore
0,3X10^-5........10,4
0,5X10^-5........14.5
1,0X10^-5........22.5
3,3X10^-5........33,8
9,3X10^-5........40,5
prendiamo ad esempio la prima coppia di punti:
[S]= 0,3X10^-5 M; V0=10,4 micromoli/min
se converto 0,3X10^-5 M in micromoli viene:
0,3X10^-5 M= 3 micromoli
V0 la lascio così per com'è, in micromoli/s
Nel grafico uso quindi le coordinate:
1/[S]= 0,3 e 1/V0= 0,09 che arrotondo a 0,1
quindi punto A(0,3; 0,1)
stessa cosa per trovare gli altri punti
Dici che risulta lo stesso? |
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