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Autore Discussione  

Dorina
Nuovo Arrivato

Prov.: Monza
Città: Milano


30 Messaggi
Inserito il - 08 settembre 2007 : 18:54:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dorina Invia a Dorina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti,c'e qualcuno che mi puo spiegare come posso fare la verifica dell'amplificato (PCR quantitativa con Taqman). Grazie!
Dorina Qehajaj

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 08 settembre 2007 : 22:38:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa, non ho capito la domanda... cosa intendi con "verifica dell'amplificato"? Vuoi essere sicura che il tuo amplificato sia proprio quello giusto dopo realtime?
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Dorina
Nuovo Arrivato

Prov.: Monza
Città: Milano


30 Messaggi
Inserito il - 09 settembre 2007 : 00:20:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dorina Invia a Dorina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve Chico80,volevo sapere come analizzare i dati della CT,cioè da Amplification Plot trovare i dati quantitativi? Perche non capisco bene la trasformazione della fase esponenziale in valori quantitativi. Spero di essere chiarà perchè ho bisogno di capire questa fase della Real Time.
Dorina Qehajaj
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 09 settembre 2007 : 00:42:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Prova a vedere se queste discussioni ti chiariscono la cosa, in caso contrario chiedi pure!

http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1423
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=3813
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RNA world
Utente Junior

dna



370 Messaggi
Inserito il - 09 settembre 2007 : 12:12:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RNA world Invia a RNA world un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Corsa su gel?
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Dorina
Nuovo Arrivato

Prov.: Monza
Città: Milano


30 Messaggi
Inserito il - 09 settembre 2007 : 15:54:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dorina Invia a Dorina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie,ho capito qualcosa.Vorrei fare anche una domanda forse banalissima: quando si fa la curva di standard che valori mettiamo nelle ascisse e nelle ordinate e puoi il controllo positivo a che serve? Si volevo sapere pure la corsa su gel.
Dorina Qehajaj
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 10 settembre 2007 : 02:22:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La corsa su gel può essere utile quando metti su una nuova realtime (nuovi primers etc) per assicurarti di avere la corretta amplificazione.
In pratica alla fine della realtime carichi su gel l'amplificato, come se fosse una PCR normale. In questo modo puoi confermare che la lunghezza dell'amplificato sia quella giusta ed eventualmente lo puoi fare sequenziare.

Per quanto riguarda la curva standard: sull'asse x hai la [standard] (generalmente su scala logaritmica) e su y hai il Ct (ciclo soglia).

Vedi anche:
http://www.uic.edu/depts/rrc/cgf/realtime/stdcurve.html
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Dorina
Nuovo Arrivato

Prov.: Monza
Città: Milano


30 Messaggi
Inserito il - 10 settembre 2007 : 22:15:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dorina Invia a Dorina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie Chicko80,mi hai chiarito tante cose!
Dorina Qehajaj
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