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Limpet
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
83 Messaggi |
 Inserito il - 14 aprile 2010 : 13:55:17
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Salve a tutti
ho una domanda, magari banale, su T melting di un primer e la temperatura di annealing per mandare PCR.
la Tmelting è, in generale, la temperatura alla quale la metà del DNA si trova nello stato a doppia elica, e l'altra metà in quello denaturato; è dipendente dal suo contenuto in GC (che creano 3 legami H fra i filamenti, quindi ci vuole molta energia per scinderli) da qui la famosa formula per calcolarla
Tm = [4(G + C) + 2(A + T)] °C
capisco che una T superiore a quella di melting provochi una maggiore "denaturazione del DNA" ovvero una > separazione dei filamenti, ma perchè il contenuto in GC condiona l'appaiamento del primer alla sequenza? la T di annealing infatti si calcola su quella di melting -4°C
mi sapete aiutare?
grazie
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T melting T 
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