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Vertigo
Nuovo Arrivato
Prov.: Bari
Città: Noicattaro
5 Messaggi |
 Inserito il - 12 settembre 2014 : 10:57:42
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Ciao ragazzi/e,
volevo solo un piccolo chiarimento in merito al protocollo della reverse transcriptase PCR: nel mix di reazione utilizzato per tale procedura, se dovessi eccedere con il buffer, cioè se dovessi metterci un volume doppio di buffer che cosa potrebbe succedere alla reazione? dovrei avere lo stesso la retrotrascrizione?
Un grazie anticipato a tutti
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2014 : 12:59:57
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| Succederà che tutti i reagenti saranno a metà concentrazione. A naso direi che probabilmente la reazione avverrà, ma sarà meno efficiente. |
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Vertigo
Nuovo Arrivato
Prov.: Bari
Città: Noicattaro
5 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2014 : 18:46:43
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Sulla perdita di efficienza mi trovi perfettamente d'accordo.
Il mio unico dubbio è: se raddoppio il solo volume di una delle componenti del mix di reazione, in questo caso il buffer (ma mantenendo i volumi di dNTPs, enzima, DTT etc secondo quanto indicato dal protocollo del kit)tutte le componenti sarebbero veramente dimezzate?
Grazie comunque per la tua risposta |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 13 settembre 2014 : 13:05:13
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| Beh, "dimezzate" era un'approssimazione... bisognerebbe fare bene i calcoli per vedere l'esatta concentrazione, dipende ovviamente da quanto metti di ciascun componente. |
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