Denaturazione proteine & precipitazione DNA

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Discussione

vivisax79
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: Napoli

4 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2007 : 15:20:03

ciao a tutti!
volevo sapere dove posso trovare delle informazioni pi� dettagliate circa le funzioni di detrminate sostanze utilizzate comunemente in laboratorio.
Per esempio:la guanidina isotiocianato perch� viene utilizzata nell'estrazione di Rna?quali caratteristiche chimiche ne fanno un buon inattivatore delle Rnasi?
oppure, il fenolo come fa a denaturare le proteine?
o ancora:perch� l'etanolo serve a far precipitare il dna??
spero che qualcuno mi possa aiutare a trovare un afonte per soddisfare la mia curiosit�
grazie 1000
viviana

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2007 : 21:58:12

La guanidina isotiocianato denatura le proteine. La sua azione non � selettiva per le RNAsi, ma probabilmente � abbastanza potente nel denaturarle, quindi si usa al posto di altri composti.
Se guardi la struttura della guanidina isotiocianato vedrai che come il fenolo ha un anello aromatico.
La struttura di una proteina � determinata dalle forze in atto sui suoi vari gruppi. In generale c'� sempre una minima quantit� di acqua che fa un po' da "collante" per tenere la proteina nella sua struttura corretta (es. tramite legami idrogeno).
Se metti una proteina in un ambiente non acquoso come il fenolo o l'isotiocianato, avrai una modifica di queste forze perch� andrai ad aggiungere interazioni aromatiche o di Van der Waals fra il fenolo e i gruppi aromatici e neutri della proteina.
Il meccanismo preciso di denaturazione credo cambi da proteina a proteina.

Infine, l'etanolo precipita il DNA perch� ha una costante dielettrica minore dell'acqua e quindi favorisce il complessamento del DNA carico - con gli ioni + (es. Na+, Mg++) presenti nella soluzione.
Vai quindi a formare dei sali del DNA che sono poco solubili e precipitano.

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vivisax79
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: Napoli

4 Messaggi

Inserito il - 11 luglio 2007 : 17:04:37

grazie per la risposta solerte ed accurata!spero di poter ricambiare un giorno

viviana sasso