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Neuro_francy
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1 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2018 : 16:15:18

Ciao a tutti! Vorrei esporre un mio dubbio riguardo ad un'analisi densitometrica effettuata ultimamente.. Premetto che utilizzo il software free ImageJ.
Al termine del WB la banda relativa alla proteina di mio interesse era abbastanza blanda ma comunque visibile, mentre il segnale dell'housekeeping era netto. Quando ho fatto la densitometria, il software mi ha restituito dei valori un po' strani: i valori di densit� delle bande della mia proteina sono pi� alti di quelli dell'houseweeping.. Pertanto i rapporti tra proteina/actina sono maggiori di 1.. Sono alle prime armi in termini di densitometria. Il mio dubbio �: posso fidarmi dei valori ottenuti?
NB: la densitometria � stata fatta con lo stesso software da due persone diverse, ed i valori sono molto simili, quindi non credo di aver sbagliato io.
Grazie a chiunque voglia fugare il mio dubbio!

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2018 : 22:38:04

Non avendo visto l'immagine mi affido a quello che hai scritto, e questo

Citazione:
la proteina di mio interesse era abbastanza blanda ma comunque visibile, mentre il segnale dell'housekeeping era netto

va in contrasto con questo:

Citazione:
i valori di densit� delle bande della mia proteina sono pi� alti di quelli dell'houseweeping

Quindi

Citazione:
Il mio dubbio �: posso fidarmi dei valori ottenuti?

No! Le macchine/software restituiscono dei valori, ma a volte sbagliano e sta a noi capire se la macchina sta dando dei risultati sensati o no (come stai facendo tu in questo caso).
Se quello che vedi non corrisponde ai numeri che la macchina restituisce c'� un problema a qualche parte.
Purtroppo senza vedere l'immagine mi viene difficile capire dove.
Le domande che mi farei al posto tuo: � stato sottratto un background (come? quando? dove?)? Le bande sono state selezionate correttamente? Ci sono degli aloni attorno alle bande che possono inficiare la densitometria?

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
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