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7 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2007 : 18:50:56

Ciao ragazzi! Non riesco a capire bene come calcolare il rapporto tra frammento da ligare e plasmide. Ad esempio se ho un frammento di 800bp da ligare in un plasmide di 5000 bp, il rapporto molare sar� di circa 1:6. Ed il rapporto tra ng frammento:ng plasmide? Nella reazione di ligazione i ng di frammento devono essere maggiori di quelli del plasmide. Come si calcolano? Poniamo che io voglia usare 25ng di plasmide..quanti ne devo aggiungere di frammento? Aiuto..non ci capisco nulla!!! Grazie!!!
Miki

Michi

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1001 Messaggi

Inserito il - 08 febbraio 2007 : 19:05:26

Se metti lo stesso PESO di plasmide ed inserto, in questo caso il numero di molecole di inserto sara' 6 volte maggiore del numero di molecole di plasmide, perche l'inserto e' 6 volte piu leggero del plasmide.

Ora, sta a te decidere quanto piu' inserto vuoi (in termini di numero di molecole)..
Poniamo che tu voglia 10 volte piu' inserto, no?
Allora io metterei 25ng di plasmide e una cinquantina di inserto (il doppio).. In questo modo hai circa 12 volte piu' inserto!