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Limpet
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: Roma
83 Messaggi |
 Inserito il - 15 giugno 2015 : 18:47:12
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Salve,
mi accingo a estrarre RNA con il kit ambion purelink mini kit.
Cerco di capire la funzione di ogni buffer e solvente, perchè anche se un kit con tutto pronto, direi che è importante.
Dopo avere lisato meccanicamente il tessuto, sapete dirmi quale è la funzione dell'aggiunta dell'etanolo 70%? nella sezione binding/washing?
Lo chiedo perchè in alcuni protocolli modificati utlizzano invece l'EtOh 100%.
Vi riporto il protocollo---> al paragrafo Binding, Washing and Eluition:
1. Add one volume of 70% ethanol to the tissue
homogenate
2. Mix thoroughly by shaking or vortexing to disperse any
visible precipitate that may form after adding ethanol.
3. Transfer #8804;700 #956;L of the sample (including any
remaining precipitate) to the Spin Cartridge.
4. Add 700 #956;L Wash Buffer I to the Spin Cartridge.
Centrifuge at 12,000 × g for 15 seconds at room
temperature. Discard the flow-through and the
Collection Tube. Place the Spin Cartridge into a new
Collection Tube.
etc etc etc
L'etanolo dovrebbe portare via tutte le impurità (proteine e altro...) no?
Continuo a cercare risposte on-line ma attendo vostre nuove. Siete sempre molto utili.
Grazie,
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Estrazione RNA pure
Didattica
