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 mutagenesi sito specifica mediata da PCR		  Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
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Autore Discussione  

gabo1991x
Nuovo Arrivato



20 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2013 : 18:27:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gabo1991x Invia a gabo1991x un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti! Sto studiando come fare mutagenesi sito specifica utilizzando PCR ed il processo non mi è molto chiaro!
Ho capito che costruisco due primer che presentano un miss match ovvero che contengono la mutazione che voglio inserire nel mio tratta di DNA ma non capisco poi perchè dopo i cicli di amplificazione e mescolamento ottengo la mia molecola di DNA mutata! grazie

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 07 febbraio 2013 : 13:49:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La PCR crea un nuovo filamento con la mutazione. Quindi nell'eppendorf avrai una mix del vecchio plasmide (prodotto in batteri, metilato e senza mutazione) e del nuovo plasmide (prodotto in eppendorf, non metilato e con la mutazione).
Alla mix aggiungi DpnI https://www.neb.com/products/R0176-DpnI che è un enzima che taglia i plasmidi metilati e ti restano solo quelli non metilati (con la mutazione).
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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gabo1991x
Nuovo Arrivato



20 Messaggi
Inserito il - 07 febbraio 2013 : 17:36:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gabo1991x Invia a gabo1991x un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille :)
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Barcellona


1914 Messaggi
Inserito il - 07 febbraio 2013 : 19:30:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
L'inventore è un Nobel della university of british columbia

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