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Luciano89
Nuovo Arrivato
Prov.: Na
Città: Napoli
10 Messaggi |
 Inserito il - 10 ottobre 2011 : 12:17:51
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Buongiorno Ragazzi,
Devo portare un articolo ad un esame,e in questo articolo si parla dei meccanismi di metilazione delle C collegati ai meccanismi di metilazione di H3K9 e H3K27 trimetilati..una cosa non mi è chiara:per quantificare gli H3K9 e H3K27 trimetilati viene fatta una Chip(cromatin immunoprecipitation) con anticorpi specifici per H3K27 e 9 trimetilati,per immunoprecipitare viene aggiunto sperma di salmone(mi spiegate il perchè?)e una volta reverso il legame proteine DNA,viene fatta una real time pcr..ma in questo modo io quantifico il DNA che si era legato agli istoni trimetilati,non la quantita di istoni trimetilati..posso usare la stima del dna per quantificare gli istoni trimetilati??(H£K9 e H3K27??)
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Luciano89
Nuovo Arrivato
Prov.: Na
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 10 ottobre 2011 : 12:27:37
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Ah scusatemi se ne approfitto :D,un altra piccola cosa sulla quale vorrei vostre conferme è invece sulla metilazione del Dna.Questo prima viene trattato con sodio solfito che deamina le C solo se non sono metilate trasformandole in U mentre le C metilate restano tali.Poi segue 2 approcci:
-Fa PCR specifica per lo stato metilato e non metilato e su questa fa analisi semiquantitative.Io l ho interpretato così:Faccio Pcr con 2 coppie di primer diversi,una coppia che ha le T al posto delle C(specifica per lo stato non metilato),e una coppia che ha le C non sostituite da T(specifiche per lo stato metilato)
Faccio correre i prodotti di pcr e li analizzo con software che mi stimino l'intensità delle bande(ciò vuol dire analisi semiquantitative no?),così a seconda dell'intensita dell'una o dell'altra banda mi faccio un'idea sullo stato di metilazione del DNA.
-L'altra cosa che fa è il pirosequenziamento,dopo aver fatto una pcr con un GC rich solution,ossia fa la sequenza per vedere quante c sono state sostituite da t?(conosco la metodica del piroseq,volevo solo capirne il senso in questo contesto)..
Grazie Ragazzi |
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SionYasu
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2011 : 15:23:24
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Ciao Luciano.
Vedo che sei di napoli,e credo che dovremo fare lo stesso esame ;-)
hai mp |
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