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Lavinia94
Nuovo Arrivato
34 Messaggi |
 Inserito il - 21 maggio 2015 : 09:42:02
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Per la selezione delle cellule che hanno incorporato il plasmide ricombinante a che serve il gene lacI? (su lacZ' ci sono, ma lacI a che serve??)
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Thermocycler
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Prov.: vr
Città: verona
14 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2015 : 10:15:28
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| codifica per la proteina repressore che lega la sequenza operatore. |
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Lavinia94
Nuovo Arrivato
34 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2015 : 13:26:06
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Citazione:
Messaggio inserito da Thermocycler
codifica per la proteina repressore che lega la sequenza operatore.
ma LacI (inibitore)è espresso costitutivamente e quindi lacZ viene sempre represso in quanto X-Gal ha la funzione di substrato della betagalattosidasi, ma il suo metabolismo non produce un repressore dell'inibitore.... quindi non si potrebbero distinguere colonie blu bianco?!? come funziona?!?! |
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Thermocycler
Nuovo Arrivato
Prov.: vr
Città: verona
14 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2015 : 23:31:52
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una cosa per volta:
LacI viene espresso costitutivamente ed in assenza di allolattosio o IPTG inibisce la trascrizione legando LacO(operatore).
In presenza un attivatore la proteina repressore dissocia dal sito LacO permettendo l'espressione del gene.
LacZ esprime per beta galattosidasi, un enzima che può utilizzare x-gal come substrato.
quindi:
-se lacZ viene espresso avrò una colonia blu, che testimonia la presenza del plasmide
-se lacZ non viene espresso avrò una colonia bianca
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Lavinia94
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34 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2015 : 14:22:32
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Citazione:
Messaggio inserito da Thermocycler
una cosa per volta:
LacI viene espresso costitutivamente ed in assenza di allolattosio o IPTG inibisce la trascrizione legando LacO(operatore).
In presenza un attivatore la proteina repressore dissocia dal sito LacO permettendo l'espressione del gene.
LacZ esprime per beta galattosidasi, un enzima che può utilizzare x-gal come substrato.
quindi:
-se lacZ viene espresso avrò una colonia blu, che testimonia la presenza del plasmide
-se lacZ non viene espresso avrò una colonia bianca
ma il plasmide contiene anche lacI, che inibisce l'espressione di lacZ...quindi le colonie dovrebbero esere tutte bianche |
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