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Matteo1987
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 13 settembre 2011 : 23:02:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Matteo1987 Invia a Matteo1987 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti! Sono nuovo e quanto prima provvederò a presentarmi, ma ho urgente bisogno del vostro aiuto!
Allora, nel laboratorio dove sto svolgendo la mia tesi abbiamo dei dubbi sulla quantificazione del DNA plasmidico;
da lettura spettrofotometrica a 260 nm del nostro plasmide purificato abbiamo ottenuto O.D.260 = 0,113.
Dato che la diluizione era 1:50 i conti sono i seguenti:
0,113 x 50 ng/mL x 50 = 282,5 ng/ mL
Adesso il problema é: come si calcola il numero di copie del plasmide?
La formula che stiamo utilizzando al momento prevede numero di Avogadro, numero di nucleotidi del plasmide e peso molecolare medio di un nucleotide...
Avete idea se può essere corretta?

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 14 settembre 2011 : 00:31:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
A occhio direi che è giusto, o meglio quelli sono i fattori da considerare però visto che non hai scritto la formula non possiamo dirti se sia corretta o meno.

Comunque sia qua trovi spiegati i conti: http://www.mncf.tulane.edu/Protocols/copy%20number%20calculation%20for%20qpcr.pdf
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Matteo1987
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 14 settembre 2011 : 22:59:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Matteo1987 Invia a Matteo1987 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille dell'aiuto, ho risolto il mio problema!
Comunque nella formula che ho riportato sopra per il calcolo della concentrazione ho sbagliato l'unità di misura: sono ng/#956;L
Grazie ancora!
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Matteo1987
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 14 settembre 2011 : 23:01:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Matteo1987 Invia a Matteo1987 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
nanogrammi/microlitro
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