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riky
Nuovo Arrivato
Città: milano
12 Messaggi |
 Inserito il - 23 febbraio 2011 : 13:10:29
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Ciao, ho bisogno del vostro aiuto!!
Ho un pò di confusione e spero di esser chiaro..
Eseguendo un elettroforesi capillare con sequenziatore automatico si può sia usare una variante della PCR in cui il DNA viene amplificato con una DNA polimerasi a partire da un UNICO primer di sequenza in presenza, oltre ai normali precursori nucleotidici, di una miscela di ddNTPs ciascuno marcato con un fluorocromo differente sia usare una classica PCR con DUE primers forward (MARCATO) e reverse. coem avviene il sequenziamento in quest'ultimo caso? come distingungo i nucleotidi aggiunti?
Grazie mille..ho l'esame a breve e sono entrato in panico!!
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riky
Nuovo Arrivato
Città: milano
12 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2011 : 19:48:58
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ho fatto un passettino in avanti ma non ci salto fuori del tutto..
Nel sequenziamento automatico diSanger, usando dei dye primers, come leggo la sequenza? ogni primer è marcato con un diverso fluorocromo? devo eseguire 4 reazioni in 4 diverse provette?
AIUTO AIUTO AIUTO...grazie grazie grazie |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2011 : 21:52:28
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Guarda, non è niente di complesso. Per dirla con Guida galattica per gli autostoppisti: Don't Panic! Purtroppo non ho tempo per aiutarti in modo diretto, tuttavia a questa pagina dovresti trovare basilari risposte ai tuoi quesiti: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21117/?rendertype=figure&id=A6477
Questa parte finale ti interesserà particolarmente:
Citazione:
The chain termination reactions are carried out in a single tube, with each dideoxynucleotide labeled with a different fluorophore. In the automated sequencer, the bands in the electrophoresis gel move past a fluorescence detector, which identifies which dideoxynucleotide is present in each band. The information is passed to the imaging system. The printout from an automated sequencer. The sequence is represented by a series of peaks, one for each nucleotide position. In this example, a green peak is an ‘A’, blue is ‘C’, black is ‘G’, and red is ‘T’.
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So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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riky
Nuovo Arrivato
Città: milano
12 Messaggi |
Inserito il - 24 febbraio 2011 : 10:59:28
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| Ciao Obarra1, grazie per la tua disponibilità..il link che mi hai postato spiega il metodo Dye terminator, dove ogni ddNTP è marcato con un diverso fluoroforo..Io volevo sapere come funziona il metodo dye Primers dove i primer sono marcati al 5' con diversi fluorofori..sembra essere un metodo un pò in disuso e in giro non ho trovato nulla..grazie |
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