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Discussione

clara84
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 31 agosto 2011 : 17:10:11

Ciao ragazzi!
devo risospendere per la prima dei primers e non vorrei fare una cavolata...come si fa?!
Vi do qualche dato: il primo e' concentrato 31.8 nmoli = 0.19 mg. Io lo vorrei risospendere per averlo concentrato 100 picomoli. Vi sembra una concentrazione accettabile? Come faccio?
Scusate ma sara' la mia prima PCR!

SpemannOrganizer
Utente

Citt�: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 31 agosto 2011 : 17:23:14

Io in genere risospendo a 100 uM (la mia soluzione stock). Da queste mi ricavo working solutions di 10 uM. Il volume di acqua che devi aggiungere per ottenere 100 uM � scritto sul data sheet allegato con i tubi dei primer.

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 31 agosto 2011 : 17:47:12

Benvenuta su Molecularlab clara84!

Ci sono dei grossi errori in quello che hai scritto, � bene sapaere la differenza tra una concentrazione (http://it.wikipedia.org/wiki/Concentrazione) e una quantit�! Tu hai una certa "quantit�" di primer espressa in numero di moli, o nanomoli nel tuo caso(31.8 nmoli) o in milligrammi (0.19 mg) e devi sciogliere quella quantit� per portarlo ad una determinata concentrazione che potr� essere espressa in Molarit� (o sui sottomultipli) o in gr/L (o sottomultipli), non di certo come altra quantit� come hai scritto tu:

Citazione:
100 picomoli

le picomoli sono una quantit� non una concentrazione!

Quindi in generale se non ci dici a che "concentrazione" li vuoi portare non ti possiamo aiutare.
Comunque sia una buona concentrazione a cui preparare i primers � come diceva SpemannOrganizer 100 uM e poi da questa prepararsi soluzioni da 10-20uM da utilizzare per la PCR.

Ora tu hai il numero di "nanomoli" (31.8 nmoli) e la concertazione a cui vuoi portarlo (100 uM) che conto faresti?
Ti do un aiuto anche se dovresti saperlo 100uM = 100 nmoli/ml
inoltre queste pagine ti possono essere d'aiuto ad imparare come si fanno i conti in laboratorio: http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/

se non sei sicura scrivi pure qui i conti che faresti e il risultato per avere conferma della loro correttezza.