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 southern blot e frammenti di restrizione
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ronnqvist
Nuovo Arrivato



21 Messaggi

Inserito il - 16 luglio 2011 : 18:25:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ronnqvist Invia a ronnqvist un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ho fatto l'esame di genetica ieri (non è andato tanto male!) ma non ho ancora capito dove ho sbagliato in una domanda, che presentava 3 "rettangoli" del Southern dove dovevo disegnare delle "lineette" per indicare i vari frammenti di restrizione; mi diceva che tagliavo un segmento di DNA ottenendo dei frammenti di 12, 7 e 5 kb.
Ora, sinceramente ne ho fatte tante di mappe cosi ma non so perchè mi sento rimbambita
non so come verrebbero sti maledetti rettangoli.... faccio esempio. so (presumo) che i risultati dovrebbero venire così:

1)______________________
12 -----


7
5 -----

2)______________________

12 -----


7
5

3)______________________

12


7 -----
5 -----




anche se NON HO IDEA DEL PERCHE... un mio amico mi ha spiegato sbrigativamente "perchè uno è "taglia, taglia", uno è "taglia, non taglia" e laltro è "non taglia non taglia" quindi ++,+-,--... ma non me lo spiego... qualcuno mi illumini per favore

Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1043 Messaggi

Inserito il - 16 luglio 2011 : 18:46:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa ma non ho capito nemmeno io quello che chiedi, e nemmeno quello che chiede l'esercizio...cioè ti chiede di disegnare tutte le possibilità di taglio in base ai diversi polimorfismi di restrizione con cui puoi avere a che fare?
Poi se dici che è un Southern non dovresti usare una sonda marcata radioattivamente? In quel caso quello che realmente "vedi" sul gel è il segmento che la sonda ha ibridato; allora mi chiedo, è possibile vedere entrambi i frammenti da 7 e 5 kb come hai disegnato per il numero (3)?

     (sonda)----*
|_____________7kb________________|________5kb_________| (tot=12kb)



Cioè, mettiamo che la sonda si ibridizzi nella regione che ho rappresentato, se noti un frammento da 7kb, non è automatico dire che dev'esserci anche quello da 5kb? O sto sbagliando?
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ronnqvist
Nuovo Arrivato



21 Messaggi

Inserito il - 16 luglio 2011 : 20:12:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ronnqvist Invia a ronnqvist un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Geeko

cioè ti chiede di disegnare tutte le possibilità di taglio in base ai diversi polimorfismi di restrizione con cui puoi avere a che fare?



si mi chiede questo.
sinceramente più che farmi una domanda sulla sonda in questione mi stavo chiedendo, se la lugnhezza totale è 12, come è possibile che in una delle possibilità ho 12+5? <_<
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 16 luglio 2011 : 20:15:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Geeko

Cioè, mettiamo che la sonda si ibridizzi nella regione che ho rappresentato, se noti un frammento da 7kb, non è automatico dire che dev'esserci anche quello da 5kb? O sto sbagliando?

Per quello basta che la sonda ibridizzi a cavallo del sito di taglio ed è possibile vedere tutti e tre i frammenti!

Comunque neanche io ho capito cosa chiedeva l'esercizio.
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Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1043 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2011 : 10:34:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da GFPina

Citazione:
Messaggio inserito da Geeko

Cioè, mettiamo che la sonda si ibridizzi nella regione che ho rappresentato, se noti un frammento da 7kb, non è automatico dire che dev'esserci anche quello da 5kb? O sto sbagliando?

Per quello basta che la sonda ibridizzi a cavallo del sito di taglio ed è possibile vedere tutti e tre i frammenti!

Comunque neanche io ho capito cosa chiedeva l'esercizio.



Grazie del chiarimento GFPina, il mio dubbio derivava dal fatto che una sonda 'a cavallo' potesse generare una concatamero dei due frammenti (7 e 5kb) e quindi falsare l'analisi..ma non consideravo che la sonda si aggiunge dopo la separazione su gel!
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