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cir
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: palermo
3 Messaggi |
 Inserito il - 01 marzo 2008 : 19:23:48
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Ciao a tutti...sono nuova del gruppo
anche se e' gia' da tempo che seguo le discussioni del forum.
Ho 1 dubbio..forse banale
Faccio analisi molecolare su specie di Phytophthora
Ieri(venerdi) ho estratto il dna da suolo...e seguendo il protocollo ho lasciato il dna overnight, in isopropanolo...
Per motivi "tecnici" dovrò completare l'estrazione lunedì.
Questo incoveniente potrebbe creare qualche problema ai miei campioni?
il dna potrebbe avere problemi se passa troppo tempo in isopropanolo?? Io credo di no..ma ovviamente nn sono sicura. Volevo qualche chiarimento..da voi...praticamente è una richiesta di aiutoo...
Grazie mille
A presto
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Cir |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2008 : 21:59:44
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Sul manuale della Qiagen, se non sbaglio, c'è scritto
che l'isopropanolo può danneggiare il DNA, e per questo
va lavato via con etanolo. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2008 : 22:48:00
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Beh la precipitazione in isopropanalo va bene overnight, per più tempo non è consigliata, rischi che si precipitino anche i sali e che si disidrati troppo il DNA rendendo difficile risospenderlo, inoltre questo potrebbe anche influire sulle reazioni seguenti che fai sul tuo DNA (x es. restrizione, sequenziamento...).
Quello che ti posso consigliare a questo punto è lavarlo molto bene con etanolo al 70%, dopo aver aggiunto l'etanolo 70% vortexa molto bene il tuo pellet e magari ripeti il lavaggio due volte in modo da eliminare il più possibile i sali.
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Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 02 marzo 2008 : 13:32:29
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| GFPina come mai consigli di vortexare bene? è un mio dubbio personale |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 02 marzo 2008 : 19:29:16
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Citazione:
Messaggio inserito da Cangrande
GFPina come mai consigli di vortexare bene? è un mio dubbio personale
Per consentire all'etanolo di entrare bene nel campione e solubilizzare i sali che possono essere coprecipitati con il DNA.
Quando si fanno il lavaggi in etanolo è sempre bene vortexare prima di centrifugare! 
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cir
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: palermo
3 Messaggi |
Inserito il - 02 marzo 2008 : 20:41:20
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Grazie....
domani farò come consigliato..due lavaggi in etanolo 70% ed anzichè flick the tube briefley to whash the pellet darò un vortex leggero.
che preoccupazione...!
vi farò sapere come andrà con il seq.
A presto |
Cir |
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estrazione dna da 
Didattica
