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Teobromina
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27 Messaggi |
 Inserito il - 13 marzo 2016 : 18:19:29
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Ciao a tutti, scusate il disturbo ma ho davvero bisogno di una mano, chi mi sa spiegare come avviene un clonaggio in frame utilizzando enzimi di restrizione che riconoscono sequenze con al loro interno un'ATG? io l'ho inteso cosi': prendiamo per esempio l'enzima SphI, il quale lascia un'estremità 3'protrudi, all'interno dell'oligo usato per fare le ali all'inserto, si inserisce la sequenza riconosciuta da SphI, in modo che le estremità coesive risultanti contengano ATG..a questo punto si cerca di inserire un'ATG sul vettore, a livello del sito di inserzione, in modo che le estremità si possano appaiare nel momento della ligazione, senza che si vada ad alterare il frame di lettura.. okay a questo punto,.. mettiamo caso che l'inserto appena inserito codifichi per una proteina tipica di coli,chiamiamola b per esempio, ora ci voglio inserire un inserto a,nel polilinker di b, e quello che voglio è far esprimere una proteina ricombinante, quindi a+b..bisogna quindi che il frame di lettura per b non sia alterato e nemmeno quello di a.. e come faccio? inserisco un'altra ATG? e dove?
Grazie a tutti, vi prego datemi una mano grandi scienziatixD
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