| Autore |
Discussione |
|
|
n/a
deleted
10 Messaggi |
 Inserito il - 10 dicembre 2008 : 23:23:12
|
Ciao a tutti,
se ho nucleotidi 100mM e voglio raggiungere mix dei 4 nucleotidi 20mM...quanto ne devo mettere di ognuno? supponiamo io voglia ottenere 100 microlitri in concentrazione 20mM.
Scusate se vi chiedo questa cosa ma in lab ci sn pareri discordanti 
Grazie e buon lavoro!
|
|
|
|
|
valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 10 dicembre 2008 : 23:39:38
|
Da 100mM a 20mM: si tratta di diluirli 5 volte...
Se volessi farne 5ul metteresti quindi 1ul di ogni soluzione di nucleotidi e 1ul di acqua...
Visto che vuoi farne 100ul invece, quanti microlitri di ogni soluzione di nucleotidi dovrai aggiungere?
|
 |
|
|
Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 10 dicembre 2008 : 23:49:14
|
| in questo modo hai una soluzione 20mM di ogni nucleotide |
|
|
|
|
n/a
deleted
10 Messaggi |
Inserito il - 10 dicembre 2008 : 23:50:47
|
Diluendo 5 volte...metterò 20 uL di ognuno per ottenere 100 uL
Is it correct?
Grazie mille...oggi ho fatto così ma qualcuno mi dice che per ottenere 20mM devo mettere 5mM di ognuno e quindi diluire 20vv ogni nucleotide. |
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 10 dicembre 2008 : 23:57:20
|
Certo! Devi sapere cosa vuoi avere!
Un conto è se vuoi una soluzione 20mM di ogni dNTP, il totale della soluzione sarà 100mM che contiene 20mM di dATP, 20mM di dTTP,20mM di dCTP e 20mM di dGTP. Allora diluisci ognuno 1:5.
Se invece devi fare una soluzione 20mM totale, quindi 5mM di dATP, 5mM di dTTP, 5mM di dCTP e 5mM di dGTP è diverso!
Non sai cosa devi fare? A cosa ti serve la soluzione? Quanta ne devi usare? |
|
|
|
n/a
deleted
10 Messaggi |
Inserito il - 11 dicembre 2008 : 00:03:48
|
Ah ok...la soluzione mi serve per PCR in cui uso tot uL di dNTP's mix 20 mM. E'la soluzione finale 20mM quindi è corretto metterne 5uL di ognuno. |
|
|
|
Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 11 dicembre 2008 : 00:06:09
|
| pero' voglio dire ma sono condizioni? e state in lab? che queste cose le fanno fare al liceo? e non sapete fare una soluzione? ....cioe' io non lo so scusa e ..ma prendete un libro non so,o consideratele come mele di colore diverso in una busta |
|
|
|
|
n/a
deleted
10 Messaggi |
Inserito il - 11 dicembre 2008 : 00:12:06
|
| Grazie comunque...ma io credo che piuttosto che sbagliare e rimanere asina a vita è meglio chiedere...magari c'è qualcuno cortese che ti aiuta!Per me è la prima volta in laboratorio! |
|
|
|
Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 11 dicembre 2008 : 00:14:39
|
Citazione:
Messaggio inserito da giorgia2
Grazie comunque...ma io credo che piuttosto che sbagliare e rimanere asina a vita è meglio chiedere...magari c'è qualcuno cortese che ti aiuta!Per me è la prima volta in laboratorio!
Sei stata promossa ad un esame di chimica generale
devi sapere dove cercarle "eventualmente" |
|
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 dicembre 2008 : 00:28:34
|
Citazione:
Messaggio inserito da giorgia2
Ah ok...la soluzione mi serve per PCR in cui uso tot uL di dNTP's mix 20 mM. E'la soluzione finale 20mM quindi è corretto metterne 5uL di ognuno.
Si ma così non hai detto niente!!!
Tot microlitri quanti sarebbero? Le mix di dNTPs si possono indicare come "concentrazione totale" o "concentrazione dei singoli nucleotidi" (indicata come "each"), sempre mix sono perchè sono assieme e non separati! Se non sai quanto ne devi mettere o se la concentrazione è espressa in totale o singoli non puoi sapere come farla!
Per fare una PCR puoi utilizzare sia una soluzione da 20mM ognuno che 5mM ognuno, ovviamente nel primo caso ne metti 1/4 rispetto al secondo caso.
Indicativamente la concentrazione "finale" nella mix di PCR è 0,2mM di ogni singolo dNTPs, quindi ad es in 20ul di reazione di PCR ne metti 0,2ul di 20mM each o 0,8ul di 5mM each.
|
|
|
|
Saretta
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Provincia di Roma
263 Messaggi |
Inserito il - 11 dicembre 2008 : 14:48:26
|
Citazione:
pero' voglio dire ma sono condizioni? e state in lab? che queste cose le fanno fare al liceo? e non sapete fare una soluzione? ....cioe' io non lo so scusa e ..ma prendete un libro non so,o consideratele come mele di colore diverso in una busta
Dai non sempre viene semplice per tutti, alla fine siamo qui per aiutarci no?  |
|
|
|
cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 12 dicembre 2008 : 14:56:36
|
Ma perchè rispondete così male ogni volta che qualcuno fa delle domande semplici e li trattate come se non capissero un fico secco di nulla?
Mio marito dall'alto della sua scienza e sapienza, nonostante avesse incontrato nella sua vita parecchie persone che non sapevano la matematica, era profondamente convinto che nessuno potesse essere così ignorante da non riuscire a fare 2+2, poi ha conosciuto me e si è ricreduto.
Tutti i semplici calcoletti che vi vengono semplicissimi, come per me fare dei passi di danza che forse alcuni di voi non saprebbero nemmeno lontanamente come riuscirci (o chissà quante altre cose che mi vengono naturali e a voi no), per molti di noi sono arabo allo stato puro.
Ciò è dovuto a due fattori:
A) il maestro o la maestra alle elementari che ha trovato la chiave giusta per entrare nella tua mente matematica ed aprirti ad un mondo a parte.
B)il fare questi tipi di esercizi in continuo, ogni giorno.
Questo ve lo dico dopo aver preso un diploma di perito chimico, essermi laureata in tecniche di laboratorio, aver preso 30 e lode in biochimica e fare ogni tanto questi calcoli, ma vi assicuro che ogni volta che devo fare anche la più semplice diluizione mi viene il mal di pancia e penso sempre di sbagliare ( anche se so benissimo come si fanno). Abbiate un minimo di decenza quando rispondete con quei toni altezzosi, perchè forse non sbaglierete questi semplici calcoli, ma poi fate errori di concetto e/o scientifici che sono decisamente più gravi che non sbagliare una semplice diluizione alla quale poi si può porre rimedio! |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 12 dicembre 2008 : 15:56:29
|
Dai cin, a parte la risposta di Patrizio, che concordo con te mi è sembrata eccessiva... non mi sembra che le persone vengano trattate male sul forum.
Se qualcuno fa domande semplici si cerca (almeno io faccio così) di farlo ragionare perchè -pur con tutte le scusanti del caso queste cose sono necessarie da fare in laboratorio e uno deve imparare a farle da solo e quindi magari meglio che ci arrivi da solo piuttosto che scrivergli la soluzione direttamente. Mi sembra che il problema sia stato spiegato molto bene da valia e GFPina. |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 12 dicembre 2008 : 16:31:50
|
gli errori di concetto o scientifici dipende a che livelli,
ma vogliamo far valere le cose che abbiamo studiato o no? a che cosa e' servito prendersi magari una laurea alla triennale?
Esame di chimica generale
chimica organica
principi di chimica fisica
biochimica I-II ...trecento...ma che studiamo le fiabe?non e' un'equazione differenziale e' 2+2 !!!
dimmi quello che vuoi ma a me quando leggo ste cose mi viene il crampo allo stomaco e dico poveri noi biologi....bravissimi quei professori che bocciano I II e 100 volte per chi non sa scrivere pH per chi non sa cos'e' un tampone etc....forse questi ragazzi sono i piu' fortunati
io sono un comune mortale o forse il peggio di qua dentro ma di certo mi vergognerei a scrivere una cosa simile |
|
|
|
|
GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 dicembre 2008 : 02:57:33
|
Concordo pienamente con chick80!
A volte le risposte possono essere un po' eccessive è vero!
Però queste cose vanno capite, secondo me è inammissibile che un "dottorando" ad esempio non sappia fare i conti in laboratorio! Se si tratta di uno studente lo posso ancora capire, ma se poi lo studente dice che in laboratorio dove presumo di siano anche persone con più esperienza che "nessuno" sa fare il conto e sa spiegare il perchè... veramente mi viene il nervoso e penso come Patrizio "come siamo messi male".
E te lo dice una che quando era studente e doveva fare una PCR chiedendo alla Biologa che era in laboratorio da anni "a che concentrazione sono questi dNTPs?" (aliquotati in una provetta assolutamente anonima con scritto solo dNTPs), la risposta è stata: "che ti importa tanto quando li metti nella mix di PCR vanno alla concentrazione giusta!" 
Che poi quando praticamente si facciano le cose si possa aver paure di sbagliare e si controllino i calcoli 10 vole è comprensibile e in fondo va anche bene, ma almeno bisogna sapere come farli! |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
|
|
Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 13 dicembre 2008 : 10:50:05
|
ehmmm... stamattina appena svegliato,volevo quotare il messaggio di neuroscienze....alla fine l ho modificato e cancellato
neuroscienze chiedo venia,la prox volta usero' i tag cosi'stiamo piu' sicuri |
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 13 dicembre 2008 : 12:47:03
|
Oppure il pulsantino  Rispondi citando, che è fatto apposta....
Ho cercato di recuperare il messaggio dal database, ma non lo trovo... strano |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
|
Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 13 dicembre 2008 : 14:37:39
|
Citazione:
Messaggio inserito da Patrizio
ehmmm... stamattina appena svegliato,volevo quotare il messaggio di neuroscienze....alla fine l ho modificato e cancellato
neuroscienze chiedo venia,la prox volta usero' i tag cosi'stiamo piu' sicuri
Non ti preoccupare, forse in effetti mi sono anche pentito di aver messo quel lunghissimo messaggio... alla fine non aggiungeva niente a quello già inserito da altri (cin e saretta) e a quello che ho già scritto in altre circostanze, tanto più che praticamente non lo ricordo integralmente tranne 1 solo concetto che è già presente nel post di cin.
Ero convinto a non riscriverlo più, proprio perché ripetitivo, ma dato che hai fatto notare che c'era una mia risposta ne riscrivo un altro simile senza poi mettere altre repliche in questo thread.
Per chi non ha tempo può anche fare a meno di leggere quanto segue, lo scrivo solo per i curiosi.
Citazione:
Messaggio inserito da Neuroscience
Nel messaggio cancellato dicevo solo che la maggioranza degli errori commessi in un laboratorio da parte di chi impara (es studenti, dottorandi, ricercatori e professori) sono causati proprio dal fatto di non chiedere conferme o aiuti. Quindi è ottimo quando si chiede per insicurezza o ignoranza al fine di imparare; è diabolico chiedere sempre senza imparare nulla; è pericoloso fare le cose comunque senza chiedere per vergogna/superbia.
Nessuno qui come nella vita sa tutto ed il concetto di difficoltà o di facilità è relativo persona per persona, argomento per argomento.
E' civiltà aiutare chi chiede aiuto, anche se si tratta di una cosa banale; mentre trovo incivile, anche se non è questo il caso, deridere o arrabbiarsi perché qualcuno chiede aiuto quando non sa qualcosa o ha dubbi al riguardo.
Possiamo discutere se dare solo la soluzione o descrivere alcuni dettagli per mettere in condizione la persona che chiede aiuto ad arrivarci da solo...
però se si trova una domanda troppo banale nel forum forse sarebbe meglio leggerla ed andare avanti senza sottolineare che chi ha chiesto aiuto non è molto sveglio e/o non ha studiato molto, oppure tirare fuori frasi del tipo "come siamo messi male", "mi vergognerei a dire cose simili", "è inammissibile che [...]" per una/due/dieci persone che chiedono aiuto nel forum come se rappresentassero il 50% o più della popolazione.
Mi dispiace ancora di più se poi queste parole sono dette da dei moderatori, che per quanto si impegnino ad aiutare e sono sempre stressati da domande stupide e ripetitive, dovrebbero, a parer mio, rappresentare dei moderatori delle discussioni, ovvero smorzare, per quanto possibile, gli spigoli e frasi un po' taglienti dette da altri.
senza offesa per nessuno
e con questa chiudo
 |
|
|
|
Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 13 dicembre 2008 : 14:57:42
|
Immagine:
38,18 KB
Ok neuroscienze ...visto che siamo a Natale saro' piu' buono |
|
|
|
|
cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2008 : 14:22:17
|
Va bè visto che siamo vicini al Natale e siamo tutti più buoni (tranne la sottoscritta che diventa ogni giorno più cattiva... )lascio correre e spero che le parole bellissime di Neuroscience ti siano arrivate dritte al cuore. |
|
|
| |
Discussione |
|
dNTP's mix
Didattica
