La gluconeogenesi č una via anabolica che parte dal piruvato per produrre glucosio. Consta quindi di 10 tappe, 7 delle quali sono la esatta reversione di quelle glicolitiche. Le tre tappe discriminanti sono quelle con DG eccessivamente negativo(nella via degradativa e quindi eccessivamente positiva nella via anabolica): La conversione di piruvato in PEP, il passaggio dal fruttosio 1.6bisfosfato a fruttosio6P ( che avviene per idrolisi del fosforile) e il passaggio da Glucosio 6P a glucosio.Questa reazione avviene grazie all'enzima glucosio 6P fosforilasi, specifico del tessuto epatico e renale. Solo questi tessuti possono reinserire glucosio nel flusso circolatorio. Il tessuto del muscolo scheletrico usa per ottenere energia glucosio 6P. La conversione di piruvato in PEP č particolarmente interessante poichč mostra un meccanismo caratteristico che permette di aggirare l'ostacolo energetico: Il piruvato viene prima carbossilato, ottenendo ossalo acetato, che successivamente decabossila e sposta gli elettroni di legame sul fosforile gamma di ATP ottenendo appunto PEP. Nelle condizioni cellulari la glicolisi e la gluconeogenesi sono vie termodinamicamente percorribili.