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Discussione

nellybio
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 02 marzo 2009 : 18:28:31

Ciao a tutti,
chiedo scusa in anticipo per la stupida question che ora cerco d'illustrarvi!!!
devo costruire un vettore che mi permette di avere un overexpression di miRNA esogeno e transfettarlo all'interno ad esempio di una spina dendritica!!come costruireste il vettore e se si vuole affiancare un gene reporter(luciferasi) dove lo porreste all'interno del vettore???!!
fate anke domande se non sono stata chiara...e scusate ma davvero non riesco a venirne fuori!!
Grazie a tutti

miky76
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 13:11:48

ciao e scusa il ritardo

per miRNA intendi microRNA?
perche' allora devi usare i vettori miRNA
ce ne sono commerciali e la trovi tutte le indicazioni di doce mettere la tua sequenza

se no....
non ho capito che vettore devi fare

gilthanas
Nuovo Arrivato

100 Messaggi

Inserito il - 08 marzo 2009 : 20:03:05

si mancano un p� informazioni per rispondere....

spesso overespressione e reporter cozzano un pochino come cose....

spesso ci sono vettori di espressione..

..e vettori reporter..dove in genere non vuoi che sia troppo forte l'espressione del reporter perch� vuoi studiare una porzione di un promotore..
..per� pu� essere anche che vuoi (e forse, se ho interpretato bene, � proprio quello che vuoi) un reporter per visualizzare il costrutto (ma allora consiglierei la fluorescenza alla lumiscenza, cos� non devi aggiungere e comprare il substrato) magari espresso insieme, quindi si parla di vettore bicistronico o IRES, al tuo microRNA di interesse...

ci sono un sacco di vettori IRES che esprimono EGFP o altre proteine fluorescenti e tidanno la possibilit� di clonare anche qualcosa che vuoi overesprimere...non sono sicuro per� di quali si adattino per i microRNA ad essere sincero