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Aidil
Nuovo Arrivato
Città: Würzburg
2 Messaggi |
 Inserito il - 16 marzo 2009 : 16:45:09
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Salve ragazzi, ho bisogno di voi!!
Devo effetuare una trasfezione transiente e usare il kit dual luciferase, abbiamo pero´un problema con il luminometro, serviranno un po´di gg per ripararlo.
Qualcuno di voi ha mai lisato le cellule con il lysis buffer e congelato il lisato in attesa di lettura?? Ho sempre usato effettuato l´analisi a momento!!! Se per favore mi dato qualche suggerimento. Inoltre lo conserverei a -80°C.
Grazie infinite
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 16 marzo 2009 : 19:30:31
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| Se è un lisato penso che puoi conservarlo tranquillamente...Nel laboratorio dove ho fatto il tirocinio preparavano un botto di lisati e li congelavano tutti, poi li usavano per le analisi che dovevano fare quando potevano... |
 
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 16 marzo 2009 : 20:11:20
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Sinceramente non l'ho mai fatto, non ho idea se l'intensità della luciferasi decada con il tempo durante il periodo di congelamento.
Io non mi fiderei tantissimo!!!
Prova a vedere in letteratura se trovi qualcuno che l'ha fatto su lisati congelati. |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 16 marzo 2009 : 20:15:02
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Citazione:
Messaggio inserito da GFPina
Sinceramente non l'ho mai fatto, non ho idea se l'intensità della luciferasi decada con il tempo durante il periodo di congelamento.
Io non mi fiderei tantissimo!!!
Prova a vedere in letteratura se trovi qualcuno che l'ha fatto su lisati congelati.
Perchè dovrebbe decadere? Non è una proteina come altre? |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
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gilthanas
Nuovo Arrivato
100 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2009 : 12:23:14
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Dipende dal tipo di kit che stai usando...
E' il dual reporter assay o il dual-glo luc assay??
C'è molta differenza tra uno e l'altro...
Nel primo caso se hai estratto le proteine con buffer PLB (Passive Lysis Buffer o qualsiasi altro buffer di lisi compatibile non c'è problema...congeli le proteine estratte a -80 o se vuoi -20 (meglio -80) e fai il saggio successivamente sulle proteine scongelate.
Se si tratta del secondo il problema è che il buffer di lisi contiene già il substrato della lciferasi e non saprei se il segnale decade oppure no...mai fatto... |
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jeje
Nuovo Arrivato
52 Messaggi |
Inserito il - 27 marzo 2009 : 16:08:04
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ciao io l'ho usato.:
lisi poi congelo in azoto e lascio a -80.
ho provato arileggere cose che avevo nel -80 da piu di un mese e l'attività della luc un pochino era diminuita. |
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Aidil
Nuovo Arrivato
Città: Würzburg
2 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2009 : 15:47:43
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Grazie a tutti!! Probabilmente compreremo un nuovo luminometro!! 
In ogni caso il kit usato e´il dual report ( no substrato) e appena avro´occasione leggero´la luciferasi di questo esperimento!! anche per avere un´idea del tempo di conservazione!
Grazie ancora a tutti e a presto
Lidia |
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Luciferase: conservazione lisato cellulare
Didattica
