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biotecvet82
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Milano
23 Messaggi |
 Inserito il - 20 marzo 2009 : 11:59:10
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Salve a tutti. dovrei effettuare un WB su una proteina di mio interesse, la proteina viene secreta nel terreno in cui soon piastrate le cellule. Considerando che recupero 5 mL di terreno, vorrei cercare di concentrare la mia proteina prima di eseguire il WB.
Avevo pensato ad una dialisi e mi hanno anche detto che esistono delle colonnine che permettono di concentrare la proteina anche in modo rapido..qualcuno di voi mi sa consigliare uno di questi prodotti o indicare una ditta che li produce? ho cercato su internet ,a senza troppi risultati.
Grazie a tutti
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 marzo 2009 : 14:18:49
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Puoi precipitare le proteine con TCA (se cerchi nel forum trovi delle discussioni e dei protocolli)
Se vuoi fare la dialisi, qua: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=4041
avevo messo tutte le informazioni.
Non so se nel frattempo sono comparsi anche nuovi tipi di colonnine.
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biotecvet82
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Milano
23 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2009 : 15:45:36
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| Grazie GFPina, gentilissima e utile come sempre;) |
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gilthanas
Nuovo Arrivato
100 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2009 : 23:33:40
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Se in lab avete una speedvac è utilissima nel caso...
ossia una pompa a vuoto dotata di centrifuga.... |
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 12:25:09
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| Ciao, le colonnine di cui tu parli forse sono le PD-10. Io ho usato quelle fornite dalla ditta Ge Healthcare per effettuare il desalting e anche per concentrare una proteina di 37KDa ma ti consiglio di leggere la sheet e vedere se le puoi usare anche per la tua proteina e in quali condizioni. Nel mio caso volevo allontanare il buffer denaturante in cui avevo eluito la proteina da una colonna al nichel e sostituirlo con il terreno di colture cellulari perchè dovevo fare degli esperimenti di trasduzione. Spero siano quello che cercavi, ciao a presto |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 13:42:39
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le PD10 vanno bene per il desalting ma non per concentrare (anzi diluiscono di solito di almeno un fattore 2),
gli amicon o i vivaspin (millipore, sartorius) possono invece fare a caso tuo... \
se cmq devi solo vederla in WB io precipiterei tutto con TCA. |
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neurobio
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2009 : 15:49:14
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Ciao a tutti!!
qualcuno di voi ha mai utilizzato un concentratore SPEED VAC? sapete dirmi la sequenza da seguire..quando creare il vuoto, quando bloccare la rotazione ...ecc.
grazie |
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Concentrare proteine
Didattica
