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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
 Inserito il - 25 marzo 2009 : 00:52:27
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CIAO RAGAZZI MI SAPRESTE SPIEGARE COME PREPARARE UN GEL SAS PAGE AL 10% O AL 4%...A CHE COSE SI RIFERISCONO QUESTE PERCENTUALI?
GRAZIE
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 01:16:36
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Detto semplicemente, sono le percentuali di acrilamide utilizzata per fare il gel.
Si utilizzano soluzioni di acrilamide/bisacrilamide ad una certa percentuale, in genere 30% e da questa si prende la quantità necessaria per fare i gel alle varie percentuali, ad es questa è una tabella per preparare 10ml di gel:
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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 19:34:01
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grazie mille ma avrei ancora una domanda...ma cm decido quale concentrazione usare nel separating gel e stacking gel?
ciao |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 20:42:47
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Nello stacking non è così fondamentale, si usa una % uguale a quella del resolving o bassa, tipo 4%-5%.
Per il resolving dipende dal peso molecolare delle proteine che vuoi separare, avevo postato una tabella qui!
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gilthanas
Nuovo Arrivato
100 Messaggi |
Inserito il - 25 marzo 2009 : 20:48:35
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| La concentrazione dipende dal tipo di proteina di interesse che vuoi visualizzare mediante WB...se sarà una proteina di piccole dimensione (per intenderci sotte i 40-50KDa la considerei di piccole dimensioni) è meglio aumentare la concentrazione, tipo 10-12%...se hai una proteina molto grossa dagli 80 e oltre i 100 in su è meglio avere un gel molto meno concentrato, tipo 4-7%...poi dipende se vuoi visualizzare sia la proteina di interesse e una proteina di controllo, "housekeeping", ossia che non cambia la sua espressione in rispota a molti tipi di trattamenti o tipi cellualri diversi (in genere si usano priteine del citoscheletro, tipo actina, tubulina e sono abbastanza piccole..); in quel caso devi arrivare ad un compromesso...il problema è che le proteine a + alto peso molecolare fanno più fatica a trasferirsi sulla mambrana durante il blotting...niente di impossible intendiamoci! |
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