Ciao sono meme qlc mi saprebbe dire che calcoli devo fare, mi hanno detto di usare la tripsina 1x della sigma diluita 1:2 in PBS, la concentrazione finale dovrebbe essere 0,25 % di tripsina e 0,1 % di EDTA
Magari la cosa migliore è chiedere a chi te l'ha detto e ti sta seguendo! Comunque se la devi diliure 1:2 in PBS fai come ha detto chick80. Se è già diluita 1:2 in PBS la devi utilizzare così com'è.
Ho 100ml per 12Unità e devo fare una concentrazione da 1X
Si ma 1X di per se non vuol dire molto, significa che è la concentrazione di lavoro che utilizzi! Ad es. se hai una soluzione 10X devi diluirla 10 volte per utilizzarla. (diventa 1X)
Bisognerebbe capire esattamente a che concentrazione è la Tripsina che hai (se è già 0,25 % di tripsina e 0,1 % di EDTA o se no a che concentrazione è) e se devi diluirla con PBS o solo aliquotarla. Così è veramente difficile aiutarti! Se non ti è chiaro qualcosa chiedi di rispiegartelo!
La concentrazione dovrebbe essere scritta sulla bottiglietta, in caso contrario leggi il codice prodotto riportato sulla confezione, vai sul sito della Sigma ( www.sigmaaldrich.com ) e inserisci quel codice.
Sulla pagina del prodotto ti danno tutte le info sulla concentrazione oltre a informazioni su come conservare il prodotto.
Ho chiesto voglio una concentrazione finale di 0,25% in 1,5ml
Il problema è che per fare i conti devi avere sia la concentrazione iniziale che quella finale che vuoi ottenere! Altrimenti non puoi sapere come diluirla!
Citazione:Messaggio inserito da meme
ora ho capito sono 3,75 microlitri su 1,5 ml
Immagino che te l'abbiano detto, allora in questo caso consideri 100% la tua soluzione iniziale e la vuoi fare allo 0,25%. Quindi: 1,5 ml x 0,25% = 1,5 ml x 0,0025 = 0.00375 ml = 3,75 ul
Ragazzi... Buon d'aprile! Volevo sapere se qualcuno poteva darmi una mano sulla cross-contaminazione cellulare e sulla detection (decomtaminazione) da micoplasma,ed in particolare sul metodo da usare se si ha a che fare con cellule pretrattate.... Grazie mille a tutti!!!!
Hai ragione... ma sai hai postato il primo aprile esordendo così:
Citazione:Messaggio inserito da bububebè
Ragazzi... Buon d'aprile!
Pensavamo ad uno scherzo!
No dai a parte gli scherzi! Non ho capito se la tua è una richiesta generale o se è un problema reale che hai in laboratorio, comunque nel primo caso ti consiglio di leggere questo: Microbiologia (ppt) e questo: Banca cellule: Micoplasma
Grazie teso che mi hai risposto!! Magari fosse un problema reale che ho in laboratorio.... vedi, io sono picculina e non ho tanta esperienza pratica in laboratorio e per questo per me, a volte, è ancora più difficile....... Diciamo che sto studiando le colture cellulari, e i vari metodi di immortalizzazione dei linfociti B da parte di EBV + ottenuto dalla linea cellulare B59-8, e dei linfociti T da parte di HVS ottenuto dall'infezione delle OMK. Ora, la prof. ha detto che la cross- contaminazione è uno dei problemi più seri a cui possono andare incontro le cellule immortalizzate, e che nei casi più drastici, non è possibile neanche il recupero,in quanto il meccanismo è molto laborioso... in particolare ha elencato una serie di linee cellulari spacciate per linee tumorali, che in realtà erano il risultato di cross-contaminazione con altre lenee continue.... mi puoi aiutare a capire ogni linea cellulare a quale neoplasia corrisponde? perchè sulle slides è tutto siglato e non riesco a individuare sull'albero della linfopoiesi a quale blasto tumorale corrisponde la linea cellulare... nella maggior parte dei casi si tratta di varie leucemie di vari livelli (M0-M7 Oppure da L1-L3) che normalmente so classificare, ma non con queste sigle burbere!! Grazie infiniteeeeee per l'aiuto!
devi elencarcele perchè non c'è un criterio distinto per l'assegnazione di un nome ad una linea commerciale..può anche derivare dal nome di un paziente (come la HeLa, isolata da un cancro della cervice uterina di tale Henrietta Lacks), quindi se la tua prof va per le spicce e vuoi sapere a cosa corrispondono i vari nomi forse ti conviene cercarli sul sito dell' American Type Culture Collection (ATCC), dove ne sono bancate a migliaia
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire)
Per esempio,la DAMI era spacciata per linea cellulare leucemica acuta mieloblastica M7,mentre invece era cross-contaminata con HEL,ossia LMA M6... La TI-1 era cross-contaminata con K592,ma a quali blasti corrispondono queste cellule?
Magari fosse un problema reale che ho in laboratorio.... vedi, io sono picculina e non ho tanta esperienza pratica in laboratorio e per questo per me, a volte, è ancora più difficile.......
Beh crescerai e lavorerai in un laboratorio anche tu!
Comunque giusto per informazione genarale, visto che ti avevo risposto solo sul micoplasma, è vero la cross-contaminazione è uno dei problemi maggiori che si incontrano lavorando con colture cellulari, sopratutto se si tratta di linee cellulari. Bisogna stare molto attenti ad evitarla!
Ok Silvi,seguirò il tuo consiglio e dò un'occhiata ai link (grazieeeee milleee )! Per quanto riguarda la detection da micoplasma,la Prof.ha parlato invece del "matching" delle colture (o una cosa simile) come metodo da usare nel caso in cui il trattamento con una determinata molecola non ha dato risultati positivi... tu l'hai mai sentito? Io non sono riuscita a prendere appunti su questa parte e mi sono persa qualche punto....Thank you so much Smack
Per quanto riguarda la detection da micoplasma,la Prof.ha parlato invece del "matching" delle colture (o una cosa simile) come metodo da usare nel caso in cui il trattamento con una determinata molecola non ha dato risultati positivi...
detta così penso si riferisca al fatto che se un metodo non funziona in genere si utilizzano più trattamenti diversi, ma non ci metterei la mano sul fuoco che intendesse quello. Credo che la cosa migliore sia chiedere a qualcun altro cosa ha scritto sugli appunti, e magari avere dettagli maggiori su cosa ha detto la Prof.
colture cellulari
Didattica
Inserito il - 31 marzo 2009 : 15:25:34
d'aprile
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!! Magari fosse un problema reale che ho in laboratorio.... vedi, io sono picculina 
e non ho tanta esperienza pratica in laboratorio e per questo per me, a volte, è ancora più difficile....
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)!
....Thank you so much 
Smack
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