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bt83
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 31 marzo 2009 : 23:09:30
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HELP ME please!
ciao....ho un problema!
dovrei amplificare "in modo aspecifico" dei campioni di cDNA"!;
cerco di spiegarmi meglio:
devo valutare i cDNA su una card di tipo Low Density Array. Durante le prime prove ho notato che i campioni retrotrascritti da estratti di RNA con concentrazione inferiore a 50ng/ul non vengono poi amplificati durante la qPCR per tutto il pannello di sonde!
In lab uso un kit per la retrotrascrizione con random primers ma ho anche la possibilità di usare un kit per la PreAmplificazione del cDNA anche se questo presuppone l'uso di un pool di primers specifici per la seq di cDNA del gene di interesse. E se io volessi amplificare in modo completo tutti gli espressi!Che tipo di primer posso utilizzare?
Avete consigli, dritte o anche meglio soluzioni?
GRAZIE!
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miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2009 : 19:07:57
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ciao
l'ideale sarebbe partire da una concentrazione piu elevata di RNA
50ng/ul e' un po poca
se potessi aumentarla nella RT sarebbe gia una soluzione
poi io so che Roche ha un kit per preamplificare cDNA che hanno una resa bassissima con la Quantitativa
l'idea di questo kit e' di amplificare il tuo cDNA come una PCR ma con primer universali
ti permette di amplificare tutto il tuo cDNA e non un solo gene di interesse
solo che nn mi ricordo il nome!!!
non l'ho mai usato
stavo solo parlando con un rappresentante roche l'altro giorno
quindi prova a chiamare il tuo rappresentante e a chiedere di questo kit spiegandogli il tuo problema
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2009 : 20:14:48
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| Mhm un passaggio a RNA in più, quindi...per gli amanti del rischio :P |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 02 aprile 2009 : 10:39:02
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ciao
non posso garantire che il kit roche sia diverso
il rappresentante, naturalmente, lo promuoveva come qualcosa di innovativo
io nn l'ho provato... perche' preferisco aumentare la concentrazione del RNA
ma basta andare credo sul sito roche e vedere
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 02 aprile 2009 : 14:52:29
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Nel caso qualcuno fosse interessato, (neanche io come miky76 ho mai provato questi kit!)
su Biocompare trovate una lista di tutti (o quasi i kit disponibili)
RNA Amplification Kits
non immaginavo fossero così tanti!!!  |
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PreAmplificazione del cDNA
Didattica
