Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
morgan79
Utente Junior
Prov.: Bari
143 Messaggi |
 Inserito il - 20 aprile 2009 : 09:16:24
|
salve a tutti, desidererei alcuni chiarimenti circa i metodi di trasfezione di cellule umane ed espressione eterologa con vettori più comuni come il pcDNA3. con più precisione vi elenco alcuni punti su cui ho imiei dubbi così qualcuno mi dice se é vero o falso
Nella espressione transiente il vettore si integra temporaneamente nel genoma ospite ed esprime la proteina. nel giro di qualche giorno il vettore viene perso, Il mio dubbio é se effettivamente il meccanismo di espressione richiede una integrazione del plasmide nel genoma nucleare.
somministrando un antibiotico specifico per il vettore in questione, questi esercita una pressione selettiva che "costringe" il vettore nel genoma nucleare e per ogni trasfezione si ottiene una serie di cloni stabili ciascuno dei quali con una posizione random del plasmide all'interno del genoma.
ringrazio chiunque mi chiarisca e mi risponde, sarebbe gradita anche qualche indicazione in letteratura
|
il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare |
|
|
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 20 aprile 2009 : 11:54:20
|
Ciao
Ci sono molte altre discussioni nel forum che parlano
di questo argomento. Quello che hai scritto è tutto
corretto, tranne una cosa: durante la fase transiente
della transfezione il plasmide non integra necessariamente,
ma lo farà soltanto in una quota infinitesimale di cellule
(eventualmente selezionabili successivamente attraverso
un arricchimento selettivo di queste e della loro progenie).
L'espressione della cassetta di pcDNA3 NON richiede alcuna
integrazione, e il plasmide viene perso per diluizione dello
stesso o per replicazione asincrona rispetto al genoma (nel
caso di cellule in grado di replicare pcDNA3, come le COS-7)
proprio perchè nella maggior parte delle cellule non integra.
|
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
 |
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
trasfezione, espressione transiente e stabile
Didattica
