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Discussione

Evil
Nuovo Arrivato

67 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2009 : 19:36:39

Oggi è sorto un problema in laboratorio, piu che altro una riflessione..

Se io integro un gene in un plasmide che ha AMPr e LacZ (in LacZ cè il polilinker), metto questo plasmide in una coltura di batteri, quindi effettuo uno screening bianco/blu... quelli bianchi saranno i batteri che hanno preso il plasmide con il gene integrato.. tra questi batteri però avrò sia quelli che hanno il plasmide con il gene di mio interesse in antisenso, sia quelli che lo hanno in senso (perchè non si è presa alcuna precauzione, quindi ho una prob del 50 e 50 che sia senso o antisenso)....
Come faccio a discriminare quali batteri hanno il gene in antisenso e quali no? devo saperlo poichè il trascritto è trascrivibile sia 5' -> 3' sia 3'->5' (grazie a T7 e SP6 fagiche) e a me serve un RNA sonda...

Grazie a chiunque voglia provare :)

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2009 : 10:43:46

potevi inserire il frammento usando due siti di restrizione diversi al 5' e 3', in modo da avere la giusta direzionalità. se non l'hai fatto secondo me la cosa più sicura da fare è sequenziare qualche miniprep.

RM
Nuovo Arrivato

115 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2009 : 12:56:50

Puoi fare una colony con primers specifici per il vettore/inserto (s/as) o vettore/inserto (as/s)in modo da discriminare i due possibili orientamenti
ciao