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guido53
Nuovo Arrivato


Prov.: Pa
Città: Palermo


13 Messaggi

Inserito il - 15 maggio 2009 : 16:15:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di guido53 Invia a guido53 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, ho bisogno di una mano per elettroporare delle cellule di E. coli dh 5 alfa, in passato l'ho fatto più volte ma avevo le cellule già fatte e i settaggi preimpostati, adesso che ho cambiato lab sto preparando le mie cellule elettrocompetenti e sistemando io l'apparecchio, un Biorad pulser II, prima io elettroporavo a 2,5Kv 25 microFa e 200 Ohm, cercando di avere una costante di tempo tra 4,6 e 4,9, ora per le cuvette che posso usare al max posso lavorare a 1,8 Kv, come devo settare resistenza e capacità?
seconda domandina, dal mio vecchio protocollo io nella cuvette mettevo 20 microlitri di batteri elettrocompetenti e 20 microlitri di DNA, ma nn ho scritto la concentrazione, mi potete aiutare su quanto DNA mettere? Vi ringrazio anticipatamente

Eleo
Nuovo Arrivato

Prov.: Pavia


89 Messaggi

Inserito il - 15 maggio 2009 : 19:31:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Eleo Invia a Eleo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
DNA 1 ng a volte pure 0,5 ng altrimenti zottavano.
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guido53
Nuovo Arrivato


Prov.: Pa
Città: Palermo


13 Messaggi

Inserito il - 16 maggio 2009 : 11:33:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di guido53 Invia a guido53 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
uhm perfetto e per quanto riguarda i parametri di elettroporazione....nessun aiuto???
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