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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
 Inserito il - 21 maggio 2009 : 19:01:41
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L'oggetto del topic dice già tutto
Mi servono uno o più vettori di espressione che possano esprimere uno o più tipi di recettori GABA in linee cellulari.
Oppure in alternativa linee cellulari che esprimono già stabilmente i recettori GABA per uno studio che vorrei fare.
Conoscete qualche ditta che vende cDNA in vettori di espressione già pronti, oppure cellule che hanno già qualche recettore del GABA?
I siti che ho visto richiedono cifre molto alte per i vettori di espressione, dai 600 $ in su, vorrei prendere qualcosa di più economico
Grazie a chi mi darà una mano
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2009 : 19:17:38
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Puoi provare qui:
http://www.origene.com/cdna/trueclone/
I prezzi variano (penso secondo la rarità del trascritto) ma in genere sono abbastanza ragionevoli..
Ciao
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miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 11:02:03
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ciao
http://www.openbiosystems.com/
i prezzi sono ragionevoli
e puoi anche comprare un cDNA non in vettore di espressione e poi lo subcloni se vuoi risparmiare molto
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 11:08:42
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grazie ho trovato quello che mi serviva,
125$ sono molto più ragionevoli...
la fregatura è che purtroppo devo ordinare almeno 3 subunità (alfa, beta e gamma) per fare un recettore attivo, per cui 125$ x 3 = 375$ e quadrupla transfezione (compreso EGFP).
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 11:22:46
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| Probabilmente lo saprai di già, ma stai attento anche alle isoforme che usi, in quanto le diverse isoforme delle varie subunità possono dare luogo a recettori con differenti proprietà. |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 12:04:36
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in teoria non dovrei fare una cosa complicata,
ho fatto sintetizzare un farmaco con lo scopo di attivare uno scambiatore ionico. Il fatto è che funziona, ho trovato anche gli amminoacidi su cui agisce e l'ho testato anche in ischemia, pare che diminuisca il danno e funzioni con un EC50 dell'ordine di 1 nM sulla mia proteina.
Su tutte le altre proteine di membrana che conosco non funziona a queste concentrazioni... però la struttura del farmaco è a base di benzodiazepina, quindi quantomeno i referee mi chiederanno se funziona o no sui recettori del GABA-A a quelle concentrazioni.
Io prenderei le subunità più diffuse nel SNC Alfa1, Beta1 e Gamma1... basta testare l'EC50 ed escludere che a quelle concentrazioni possa funzionare.
Di certo non potrei testare il farmaco su tutte le possibili combinazioni di GABA, mi basta sapere orientativamente a quale ordine di grandezza è l'EC50 sul GABA più diffuso del SNC.
Non lo posso fare sulle colture primarie neuronali poiché l'EC50 sarebbe complessa da misurare. So già che non funziona, ma ci vuole l'EC50.
incrociamo le dita.
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 12:20:17
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Ok, se è solo per un test del genere concordo con te.
Attento però che la combinazione più frequente è alfa1 beta2 gamma2!
Vedi:
McKernan, R.M. Whiting, P.J (1996) Which GABAA receptor subtypes really occur in the brain?. Trends Neurosci 19: 139-143.
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 12:50:40
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ok, inversione di marcia.... Per fortuna costano uguale ;-)
Grazie |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 13:00:30
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in effetti il Beta2 costerrebbe 920 $ oppure 1000 $ secondo lo splicing alternativo... 
uhmm... 
forse è meglio il Beta1 o il Beta3 da 125 $ 
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2009 : 13:58:46
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azz... che simpaticoni che sono...
Ho anche trovato questo sito con prezzi bassi:
http://www.cdna.org/
Purtroppo non hanno il recettore gaba-a, ma può essere sempre utile da conoscere
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L'alternativa come dicevi sarebbe di usare qualche linea neuronale che esprime GABA-A.
Ti so dire che di sicuro le cellule GT1-1 o GT1-7 lo esprimono e sono molto sensibili al GABA, ma sicuramente ce ne saranno altre. |
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Chi conosce ditte che vendono cDNA di espressione?
Didattica
