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pepy
Nuovo Arrivato

15 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2009 : 12:28:46

Ciao a tutti,spero mi possiate aiutare!Ho l'esame di biologia molecolare e non riesco a risp a questa domanda:ho clonato il cDNA della proteina X,espressa dai fibroblasti.alcuni dati sperimentali suggeriscono che questa proteina sia coinvolta nel controllo della duplicazione cell.Per verificare questa ipotesi volete ridurre l'espressione della proteina.
- pensa che utilizzare RNA interferenti possa essere una strategia da adottare?perch�?
- quali metodi conosce per produrre artificialmente RNA interferenti? in che modo pensa di introdurli nelle cell?
- quali controlli pensa sia necessario adottare nella pianificazione dell'esperimanto?
- come pensa di verificare l'abbattimento dell'espressione della proteina?

miky76
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2009 : 14:11:55

possibile che voi studenti chiedete sempre RNAi?
i prof o i libri non ve la spiegano?

esistono milioni di articoli in pubmed
molti sono rewiev

cmq si che puoi usare RNAi per ridurre l'espressione della proteina
ed e' una strategia che puoi adottare perche' se la proteina e' implicata nella duplicazione cellulare e tu non la fai espreimere
probabilmente le cellule non si duplicano e tu dimostri questa implicazione

poi esistono diversi RNAi
siRNA
shRNA
miRNA

vai su i libri o internet o pub med e leggi le differenze

come introfurli nelle cellule?
mah di solito si usa lipofectamina
ma esistono vari modi per transfettare cellule
non so quali metodi il tuo prof ti ha spiegato
vorra' che gli elenchi e spighi quelli

e per l'ultima donanda
puoi fare un western o una immuno per vedere se la proteina non e' espressa
e io metterai anche l'analisi dell'RNA per verificare se la tua RNAi e' funzionale anche a livello di RNA

pepy
Nuovo Arrivato

15 Messaggi

Inserito il - 01 luglio 2009 : 16:52:32

Grazie mille. Davvero gentile!mi hai davvero dato un aiuto importante