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Discussione |
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pepy
Nuovo Arrivato
15 Messaggi |
 Inserito il - 01 luglio 2009 : 13:30:20
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ciao!qualcuno sà risp a queste domande???
Dopo aver clonato e sequenziato il cDNA della proteina Y, si vuole stabilire in quali tessuti viene espressa e le quantità relative.
-quali metodologie conosce per ottenere queste informazioni?
-disegni per punti la stategia che intende adottare?
-descriva il principio sul quale si fonda la metodologia che intende adottare?
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mikymiky
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: lonato
45 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2009 : 18:04:56
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mhm.. al momento a me verrebbe in mente di creare un proteina chimera, facendo una fusione con un gene reporer, e vedere dove viene espressa.
oppure, mi par che la cosa migliore sia fare un southern blot usando come sonda il cDNA. A partire da un libreria di cDNA, per i diversi tessuti, vedi in quale hai ibridazione sonda.target |
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pasetz
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2009 : 18:33:40
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Ciao, io proverei anche con l'immunofluorescenza è ottima per evidenziare la presenza delle proteine nei tessuti o organelli. L'unica cosa è che poi ti servirebbe un microscopio confocale.Citazione:
Messaggio inserito da pepy
ciao!qualcuno sà risp a queste domande???
Dopo aver clonato e sequenziato il cDNA della proteina Y, si vuole stabilire in quali tessuti viene espressa e le quantità relative.
-quali metodologie conosce per ottenere queste informazioni?
-disegni per punti la stategia che intende adottare?
-descriva il principio sul quale si fonda la metodologia che intende adottare?
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pasetz
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2009 : 18:35:33
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Ciao,ho visto che sei di lonato...io poco lontano sono di bedizzole dove studi biologia molecolare? Io l'ho fatta a PdCitazione:
Messaggio inserito da mikymiky
mhm.. al momento a me verrebbe in mente di creare un proteina chimera, facendo una fusione con un gene reporer, e vedere dove viene espressa.
oppure, mi par che la cosa migliore sia fare un southern blot usando come sonda il cDNA. A partire da un libreria di cDNA, per i diversi tessuti, vedi in quale hai ibridazione sonda.target
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 04 luglio 2009 : 09:01:39
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Citazione:
Ciao, io proverei anche con l'immunofluorescenza è ottima per evidenziare la presenza delle proteine nei tessuti o organelli. L'unica cosa è che poi ti servirebbe un microscopio confocale.
Più che il confocale (che alla fine si trova facilmente) credo che il problema maggiore sarebbe avere un anticorpo per quella proteina.
Ad ogni modo SE uno ha l'anticorpo l'immunoistochimica è una buona tecnica (anche se ci sono vari esempi nella letteratura che mostrano quanto bisogna essere cauti con l'interpretarne i risultati).
Ovviamente puoi anche fare Western blot da vari tessuti/frazioni cellulari. |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 04 luglio 2009 : 09:26:03
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| Se non ha l'anticorpo potrebbe fare una proteina di fusione con un tag, che se non è troppo lungo si può inserire anche con un primer di PCR. Poi potrebbe usare un anticorpo anti-tag. |
 
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 04 luglio 2009 : 10:08:17
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Sì, ma la domanda dice: "in quali tessuti è espressa", quindi dovresti fare un animale transgenico per la proteina con il tag, il che ti prenderebbe un paio di anni per arrivare a nessuna conclusione utile visto che non sapresti se il tag influenza la localizzazione della proteina!  |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 04 luglio 2009 : 11:16:04
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Grosso abbaglio...grossissimo abbaglio!  |
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mikymiky
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: lonato
45 Messaggi |
Inserito il - 04 luglio 2009 : 22:19:56
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Citazione:
Messaggio inserito da pasetz
Ciao,ho visto che sei di lonato...io poco lontano sono di bedizzole dove studi biologia molecolare? Io l'ho fatta a PdCitazione:
Messaggio inserito da mikymiky
mhm.. al momento a me verrebbe in mente di creare un proteina chimera, facendo una fusione con un gene reporer, e vedere dove viene espressa.
oppure, mi par che la cosa migliore sia fare un southern blot usando come sonda il cDNA. A partire da un libreria di cDNA, per i diversi tessuti, vedi in quale hai ibridazione sonda.target
ti ho risp nei nei mess privati!! |
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espressione proteina
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