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GfCampione
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: Perugia
36 Messaggi |
 Inserito il - 02 luglio 2009 : 18:29:18
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Salve a tutti, l'esame si avvicina e la confusione aumenta, quindi chiedo a voi:
1. In che modo gli aminoacidi sono legati al corrispettivo tRNA ??
2. Quali sono i metodi di marcatura delle sonde oligonucleotidiche ??
3. Descrizione dei diversi meccanismi di ricombinazione e importanza biologica (in linea generale)
Vi ringrazio anticipatamente per l'aiuto !!!!!!!!!!
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GfCampione
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: Perugia
36 Messaggi |
Inserito il - 04 luglio 2009 : 17:06:45
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| Raga' nessuno sa darmi una mano????? |
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mikymiky
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: lonato
45 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2009 : 14:20:48
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1. amminoacil tRNA sintetasi: aa viene prima adenilato e poi legato al tRNA
2. in che senso metodi? sonde radioattive o fluorescenti!
3. crossing over! importanza per la variabilità e l'evoluzione |
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omega3
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2009 : 16:23:00
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Citazione:
Messaggio inserito da GfCampione
2. Quali sono i metodi di marcatura delle sonde oligonucleotidiche ??
Conosco vari metodi per la marcatura radioattiva degli oligonucleotidi:
1) Marcatura terminale al 5'
a) inserisco una fosfatasi rimuove i gruppi fosfato alle due estremità 5'
b) inserisco una polinucleotide chinasi insieme a dei [gamma fosforo 32-dATP], ovvero delle dATP che portano un fosforo 32 in posizione gamma.
Quaesta polinucleotide chinasi aggiunge alle estremità 5' dell'oligonucleotide i gruppi fosfato donati dalla dATP radioattia.
2) Marcatura terminale al 3'
a) inserisco una terminal trasferasi e delle [alfa fosforo 32-dATP]
Notare che questa volta il fosfato marcato è quello in posizione alfa, cioè quello coinvolto nel legame fosfodiesterico)
b) la terminal trasferasi trasferisce all'estremità 3' dell'oligonucleotide queste dATP radioattive
3) Random Priming
a) Si utilizzano esameri random, cioè primer di 6 nucleotidi e quindi aspecifici, che si legano in modo casuale.
b) Inserisco delle dna polimerasi particolari, dette "frammenti di klenow", insieme alle [alfa fosforo 32-dNTP]
Il frammento di Klenow è una dna polimerasi I a cui è stata tolta l'attività esonucleasica 5'-3', quindi quando procede nella polimerizazione e incontra un altro primer, questa non lo mangia ma si arresta.
4) Nick Translation
Questa volta si sfrutta proprio l'attività esonucleasica 5'-3' della dna polimerasi I.
a) A bassa concentrazione enzimatica e in presenza di ioni magnesio bivalenti, la DNAasi I introduce interazioni a singolo filamente (nicks)
b) La presenza di un nick fornisce alla dna polimerasi I l'estremità 3'-OH di cui ha bisogno
c) La dna polimerasi I polimerizza un nuovo filamente (ovviamente ho inserito anche stavolta le famose dNTP radioattive) e man mano che procede nella sintesi mangia il filamento che ha davanti.
Sia nel random priming che nella nick translation posso decidere quanto "calda" deve essere la sonda, semplicemento scegliendo di usare solo un certo tipi di nucleotide marcato, oppure due, oppure tre, oppure infine tutti e 4. |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2009 : 16:25:40
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GfCampione, per la 1 la risposta l'hai già avuta su un altro post.
Per la 2 ci sono nick translation, random priming, terminal transferasi, fosfatasi/polinucleotide chinasi, trascrizione in vitro, fago M13 e sintesi chimica. Puoi usare nucleotidi marcati radioattivamente o non con ad esempio biotina.
La 3 si parla di crossing over, trasposoni e retrotrasposoni. |
 
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GfCampione
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: Perugia
36 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2009 : 17:20:43
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| grazie mille a tutti..... Grazie mattè ;) |
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Discussione |
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Confusione !!!
Didattica
