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vesania
Nuovo Arrivato
Città: rovigo-ferrara-rovigo
98 Messaggi |
 Inserito il - 07 agosto 2009 : 15:35:09
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ciao a tutti, volevo esporvi un mio problema e vorrei capire come si può ovviare a questo inconveniente e capire il motivo di tutto ciò.
Allora in seguito ad amplificazione, il segmento genico viene sottoposto a digestione enzimatica per verificare la presenza o meno di un polimorfismo.
La digestione dura 3 ore a 37°C e mettimo 5 ul di enzima piu' il suo relativo buffer (3 ul). (a questi parametri ci sono arrivata in seguito a numerose prove).
alla visione della digestione attraverso corsa elettroforetica si vedono i frammenti di degestione molto deboli.
come mai succede questo? cosa posso fare per aumentare l'intensità dei frammenti?
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Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 07 agosto 2009 : 21:26:50
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| Se il problema è una generale debolezza aumenta la quantità di DNA che digerisci, se invece sono deboli solo le bande del digerito, o aumenti l'enzima o aumenti il tempo di digestione. |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
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vesania
Nuovo Arrivato
Città: rovigo-ferrara-rovigo
98 Messaggi |
Inserito il - 13 agosto 2009 : 12:39:11
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| tutto questo l'ho già fatto e sono arrivata alle condizioni che ho detto sopra... continuo ad avere lo stesso problema |
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Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 13 agosto 2009 : 20:02:00
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Non sono molti i fattori su cui si può intervenire in una digestione. Prova a cambiare lotto di enzima, magari quello che stai usando si è rovinato.
Metti meno DNA e ancora più enzima.
Auemnta ancora il tempo, 3 ore nn sono poi così tanto, nn ti fidare degli enzimi fast che promettono miracoli in 15'. |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
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rlfp, l'enzima funziona poco.
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