pGEM-T Easy Vector.

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emi24
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40 Messaggi

Inserito il - 05 settembre 2009 : 13:21:18

Ciao,
qualcuno di voi ha mai usato il p-GEM T Easy Vector per il clonaggio di amplificati a cui la polimerasi ha aggiunto adesonine che permettono di legare le timine del vettore?
vorrei sapere....le adenine a quali estremita'dell'amplificato sono aggiunte (alle 3' o 5'?) e le timine nel vettore a quali estremita' sono legate (5' o 3')?
vi ringrazio.

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 05 settembre 2009 : 13:56:58

...secondo te in quale direzione polimerizza la DNA polimerasi?

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

emi24
Nuovo Arrivato

40 Messaggi

Inserito il - 05 settembre 2009 : 16:59:51

Grazie per lo spunto di riflessione...deduco che l'adenina e'all'estremita' 3' cosi come la timina del vettore.
Anzi...correggimi se sbaglio...considerando che sto usando un TA-Vector aperto e defosforilato,l'inserto leghera' il vettore covalentemente solo a livello dell'estremita' 3'OH della timina mentre sull'altro filamento si avra' solo appaiamento A-T perche' il 3'OH dell'adenina non potra' legare covalentemente il vettore perche' defosforilato.
potrebbe andare???

jonh
Nuovo Arrivato

17 Messaggi

Inserito il - 05 settembre 2009 : 18:32:28

io ho usato molte volte questo vettore, quello che ti posso dire � che il clonaggo escono sempre al 1 tentativo, la parola easy non � nel nome di sicuro non � un abuso