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germy
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74 Messaggi

Inserito il - 25 settembre 2009 : 22:28:11

Salve a tutti..
vorrei porvi una questione abbastanza banale ma molto strana.
Sto lavorando con dei vettori plasmidici di 3000pb circa e sto inserendo all'interno inserti della grandezza di circa 1200pb.
Dopo aver effettuato il clonaggio e la successiva estrazione del plasmide l'ho digerito con gli stessi enzimi con cui l'avevo linearizzato.
nella corsa elettroforetica ho posto un pozzetto col NON-DIGERITO e uno col digerito (premetto che si trattava di molti campioni non solo 2).
il risultato per ciascun caso � stato:
1- una banda per il non digerito
2-una banda per l'inserto inserito come controllo
3- i digeriti hanno dato ovviamente 2 bande, una corrispondente all'inserto e (cosa molto strana) una che rappresenta il vettore che ha corso esattamente quanto il dna non digerito. la cosa si � verificata per tutti i campioni che ho caricato.

volevo a questo punto chiedervi: dato che � possibile che il plasmide circolare abbia una migrazione differente rispetto al linearizzato,ma � molto strano che le bande abbiano "casualmente" la stessa altezza..come � possibile??

grazie in anticipo