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Army
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Città: napoli
30 Messaggi |
 Inserito il - 13 ottobre 2009 : 10:32:33
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Salve vorrei un aiuto per quanto riguarda estrazione di RNA. Io avevo alcuni campioni conservati in trizol a -80 e per facilitarmi l'estrazione ho utilizzato delle eppendorff con il gel che mi separano bene le due fasi ma essendo passato ora ad utilizzare campioni conservati non più in 500ul ma in 1ml di trizol il gel sembra nn riuscire a separe le due fasi e si mischia tutto. a questo punto ho trovato in lab il kit RNeasy della quiagen ma nn so se posso usarlo con campioni conservati in trizol qualcuno sa dirmi che fare?????
Grazie mille
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2009 : 11:48:58
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No non puoi mischiarli sono due metodi di estrazione diversi (il trizol contiene fenolo), dovresti procedere ad una normale estrazione con cloroformio e poi puoi utilizzare il kit RNeasy per purificare ulteriormente il tuo RNA.
Ci sono varie metodiche, ad es. questa: Total RNA Extraction with TRIZOL Reagent and Purification with QIAGEN RNeasy Mini Kit
Oppure se vuoi utilizzare il tuo gel (non l'ho mai provato), potresti suddividere in 2 il tuo ml e riunirlo alla fine. |
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Army
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
30 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2009 : 12:44:12
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Grazie mille ora do uno sguardo e ti faccio sapere.
Grazie |
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Army
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
30 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2009 : 13:33:03
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Salve ho appena finito di fare l'estrazione di RNA con TRIZOL della roche e inaspettatemente il mio pellet dopo la precipitazione è uscito rosa a differenza delle altre volte che ho utilizzato campioni conservati in TRIZOL invitrogen dove il pellet era trasparente o bianco sapreste darmi un aiuto?!?!?
Un altra cosa che ho cambiato è stato il cloroformio nel senso che questa volta ho usato cloroformio isoamilico e non solo cloroformio come le altre volte.
Attendo una vostra risposta..... |
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Estrazione RNA
Didattica
