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tambua
Nuovo Arrivato
50 Messaggi |
 Inserito il - 14 ottobre 2009 : 11:40:13
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Piccola domanda:
Dopo una PCR supponendo di voler purificare il prodotto di amplificazione da contaminanti di vario tipo (prodotti aspecifici, incompleti) mediante gel-elettroforesi per una successiva ligazione in un vettore, come si può procedere?
Il buffer di partenza non deve essere sostituito con uno compatibile con la corsa e poi successivamente con la ligazione?
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 14 ottobre 2009 : 12:18:29
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Non ho capito benissimo la tua domanda.
Comunque il genere quello che puoi fare è seminare il prodotto di PCR su un gel e dopo l'elettroforesi excidere dal gel la banda contenente il tuo amplificato, purificarlo e poi procedere alla ligazione.
Non mi è chiaro il tuo discorso sui buffer comunque ovviamente in ogni passaggio utilizzi i buffer appropriati, ma non è che li sostituisci: per seminare il prodotto di PCR gli aggiungi il sample buffer che conterrà glicerolo (o saccarosio) per far precipitare il campione nel pozzetto e uno o più coloranti per seguire la corsa.
Poi una volta estratto il frammento dal gel, quando devi fare la ligazione userai il buffer per la ligazione.
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tambua
Nuovo Arrivato
50 Messaggi |
Inserito il - 14 ottobre 2009 : 13:16:01
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Sono stato di una imprecisione unica nel formularti la domanda, comunque la risposta che mi hai fornito era esattamente quella che desideravo.
A buon rendere green fluorescent Pina  |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 14 ottobre 2009 : 14:38:59
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Ok bene!
Citazione:
A buon rendere green fluorescent Pina
Oh mi fa piacere che ognitanto ci sia qualcuno che capisce il mio nick!  |
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Elettroforesi dopo PCR
Didattica
