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netcrusher
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22 Messaggi |
 Inserito il - 29 ottobre 2009 : 21:40:49
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Gentili amici del forum non riesco a capire una cosa, ma se nella tecnica del dna footprint si marca una estremità del Dna con fosforo 32, com'è possibile che poi mi ritroverò dopo l'azione della DNasi con tanti frammenti di DNA tutti marcati???? Le spiegazioni su questa tecnica sono molto campate in aria nei libri che ho consultato......non dovremmo trovarne solo una marcata???? bah cose di pazzi
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SignorGolgi
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2009 : 01:11:38
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| Ti incollo una definizione semplice della tecnica: Il DNA footprinting è una tecnica che riesce a determinare l’esatta posizione della proteina legata ad una sequenza di DNA.Un frammento di DNA, che si suppone contenga una regione di legame, viene marcato, fatto interagire con la proteina in esame e digerito parzialmente con DNasi I.L’eventuale legame alla proteina proteggerà la regione di legame dalla degradazione endonucleasica. Durante l'esperimento,di quel frammento di DNA (che stai studiando e stai verificando se ha interazioni con una proteina) non ne hai solo una copia..ma tante!E tutte queste copie di questo frammento sono marcate a una estremità.Venendo poi sottoposte a DNasi,questa andrà a creare tagli a caso lungo la sequenza in studio dando origine a frammenti piu' piccoli (di varie dimensioni) tutti marcati.Se nella sequenza che stai studiando c'è una regione di legame con il DNA,in presenza della proteina,la DNasi non può agire in quella regione di legame e non troveremo (nella seguente elettroforesi) alcuni frammenti che si verrebbero a creare con tagli della DNasi nella regione di legame della proteina.Se sapessi aggiungere un'immagine,avrei evitato tutto questo commento perchè da una figura si capisce molto meglio.. |
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SignorGolgi
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21 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2009 : 01:18:39
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| ti ho inviato l'immagine in un messaggio privato |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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SignorGolgi
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21 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2009 : 10:02:45
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| Allegato: undefined |
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netcrusher
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22 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2009 : 17:40:26
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ho visto la foto ma comunque non si capisce, dunque per questo esperimento io ho una singola molecola di DNA ok?? ora se la marco con il fosforo 32 avrò una estremità della molecola che ha questa marcatura, poi la sottopongo a scissione da parte delle dnasi che tagliano a casaccio la molecola, e vedrò tutta una serie di frammenti che con la elettroforesi saranno visualizzabili, ora non riesco a capire in primis la marcatura a che serve e poi perchè tutte le molecole hanno una estremità marcata.......se la matematica non è un opinione il frammento marcato dovrebbe essere solo uno ovvero quello che legava nella molecola originaria il fosforo all'estremità.........se puoi essere più chiaro dottorgolgi ti sarei grato, non mi servono i disegni ma mi serve sapere sta storia del fosforo del cavolo......gracias |
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DNA Footprint megadubbio!
Didattica
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