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emi24
Nuovo Arrivato
40 Messaggi |
 Inserito il - 15 novembre 2009 : 00:44:21
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ciao,
qualcuno di voi saprebbe dirmi se in una digestione preparativa (in cui digerisco circa 15 microgrammi di DNA con 0,5-0,6 unita' di enzima per microgrammo di DNA overnight)si usa anche RNAsi? Se si,approssimativamente quanta RNAsi si utilizza e per quanto tempo si fa agire???
vi ringrazio...
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 novembre 2009 : 01:28:44
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Io non l'ho mai usata, perchè teoricamente il tuo metodo di estrazione
del DNA dovrebbe prevederne l'uso a monte, in modo da ottenere DNA
purificato, che è l'unico substrato "utile" per una digestione preparativa. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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emi24
Nuovo Arrivato
40 Messaggi |
Inserito il - 15 novembre 2009 : 15:14:10
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Hai ragione...mi hai fatto riflettere e sono andata a controllare il protocollo di estrazione per Midi-prep e l'RNAsi è inclusa nella soluzione di risospensione.Il dubbio mi era sorto perchè stavo pensando in parallelo alla digestione analitica dopo una Mini-prep e prima di eseguire una Midi-prep.
Ti ringrazio.  |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 15 novembre 2009 : 15:20:11
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Comunque buona norma sarebbe far correre una lane di DNA purificato
non digerito, per controllare che non ci siano "strisciate" di RNA
tra i pesi molecolari più bassi, e quindi verificare che l'azione
dell'RNAasi sia stata efficace e non vi sia ulteriore contaminazione
da RNA (io lo faccio solo cone le midiprep e con le maxiprep). |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
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emi24
Nuovo Arrivato
40 Messaggi |
Inserito il - 15 novembre 2009 : 15:42:20
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wauuu....le maxiprep mi mancavano!!! (diciamo che ho ancora da imparare )
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digestione preparativa del vettore ricombinante
Didattica
