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stella 86
Nuovo Arrivato
35 Messaggi |
 Inserito il - 19 gennaio 2010 : 18:04:38
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SALVE.Prima di tutto vorrei porgere i miei ringraziamenti per il buon esito dell'esame di biologia molecolare ..Grazie anche a voi ...
Ora devo affrontare l'esame di biochimica applicata e una domanda che il prof . chiede è: PCR.
Ho capito a cosa serve la PCR e perche' la si utilizza ,pero' praticamente, il prof ci fa entrare in un sito e ci dice di effettuare una pcr (teoricamente_ prendendo in considerazione una sequenza_ ..ad es. quella della tropoelastina ed illustare la tecnica di PCR)
Li' mi sembra di nn aver capito. avete delle illustrazioni o esempi che mi facciano capire praticamente come disegnarmi il primer forward e reverse ...cos'è la temperatura di melting e soprattutto quella di annealing??? grazie mille in aticipo...spero in un vostro aiuto!! GRAZIE
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2010 : 23:15:45
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Per favore non inserire lo stesso messaggio più volte anche se in sezioni diverse.
Citazione:
da Regolamento
9) Non duplicare i messaggi, nè all'interno dello stesso forum, nè scrivendo lo stesso messaggio su più forum (cross-posting), perchè ciò rende molto difficile seguire una conversazione se piu persone rispondono allo stesso messaggio in diversi forum.
Se si è indecisi in quale sezione scrivere la propria domanda sceglierne una che sembri appropriata, i moderatori provvederanno a spostarla in caso lo ritengano necessario.
Tutti i messaggi doppi verranno cancellati.
La temperatura di melting (Tm) è la temperatura a cui il DNA risulta al 50% denaturato (quindi 50% a doppio filamento e 50% a singolo), la temperatura di annealing di un primer viene scelta qualche grado sotto alla Tm in modo che il primer si attacchi alla sequenza di DNA. Non deve essere troppo elevata (superiore alla Tm) altrimenti il primer non si attacca e non deve essere eccessivamente bassa altrimenti il primer si potrebbe attaccare anche in modo aspecifico in altre regioni non del tutto complementari.
Ti consiglio di leggerti questo: http://it.wikipedia.org/wiki/Primer
Riguardo a come disegnare i primers, beh ci sono delle regole da seguire, ma non so di preciso cosa vi faccia fare il vostro prof. quindi è difficile aiutarti.
Comunque delle regole in generale le trovi qui: http://www.premierbiosoft.com/tech_notes/PCR_Primer_Design.html
(non ho trovato niente in Italiano, ma cercando un po' in internet dovresti trovarle)
Un esempio di cosa sono il primer forward e il primer reverse lo trovi in questa discussione: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=16317
attenzione che era solo un esempio e ho scritto delle sequenze di primers a caso! |
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FaFa86
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 23 gennaio 2010 : 18:32:01
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Salve...sto studiando la pcr e non ho capito come disegnare i primers A MANO...
Ho letto tante altre discussioni di questo forum ma non mi è chiaro e sarei grato se qualcuno qui mi facesse un esempio pratico con una sequenza fittizia e il metodo per disegnare forward e reverse (pratica,non teoria..cioè tm e via dicendo contenuto in gc....)
Grazie mille ;) |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 23 gennaio 2010 : 20:38:02
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Citazione:
Messaggio inserito da FaFa86
Salve...sto studiando la pcr e non ho capito come disegnare i primers A MANO...
Ho letto tante altre discussioni di questo forum ma non mi è chiaro e sarei grato se qualcuno qui mi facesse un esempio pratico con una sequenza fittizia e il metodo per disegnare forward e reverse (pratica,non teoria..cioè tm e via dicendo contenuto in gc....)
Grazie mille ;)
Beh visto che hai risposto anche a questa discussione: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=16317
in cui si faceva un esempio direi che per non fare confusione è meglio se continuimao lì nel caso tu avessi altre domande! |
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Stella86
Nuovo Arrivato
42 Messaggi |
Inserito il - 28 gennaio 2010 : 19:21:45
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| GRAZIE MILLE DI CUORE! |
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PCR
Didattica
