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LITHMI
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
 Inserito il - 29 gennaio 2010 : 21:59:28
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Ciao a tutti...vorrei chiedere spiegazioni sulla genotipizzazione TaqMan, sapete dirmi in che cosa consiste?..grazie mille!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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LITHMI
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 30 gennaio 2010 : 12:24:02
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mi sapete anche dare un link per un protocollo, dove siano ben spiegate tutte le fasi, della genotipizzzazione taqman? grazie |
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LITHMI
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 30 gennaio 2010 : 12:35:00
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altra domanda urgente sull'estrazione del DNA con metodo salino...
- a cosa serve il lysia buffer( saccarosio,tris-HCl,MgCl2,TRITON)?
-a cosa serve il buffer A (tris-HCl,NaCl,EDTA)?
-a cosa serve il detergente SDS?
- a cosa serve la proteinasiK?
-a cosa serve NaCl? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 31 gennaio 2010 : 00:50:54
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Come ti è già stato risposto:
Citazione:
"Genotipizzazione TaqMan" vuol semplicemente dire che fai una genotipizzazione con real-time usando un metodo TaqMan.
Dovresti più che altro studiarti cosa sono e come funzionano le sonde TaqMan.
http://www.tib-molbiol.com/it/lightcycler/principle/formats.html
http://sciencelauncher.com/taqman1.html
Poi di protocollo credo non ne esiste uno solo.
Per la seconda domanda il lysis buffer (non lysia), come dice la parola è il buffer di lisi e serve per lisare le cellule.
In quel lysis buffer che hai indicato tu c'è anche saccarosio che sinceramente non ho mai visto in buffer di lisi per estrazione del DNA. Il Triton serve per solubilizzare le membrane, i sali per aumentare la pressione osmotica e rompere le cellule e il tris serve per mantenere un certo pH.
L'SDS è un detergente serve sempre per solubilizzare le membrane.
Il buffer A bisognerebbe capire a che punto del protocollo è messo, è in parte simile al buffer di lisi, ma potrebbe anche essere utilizzato per i lavaggi.
La proteinasi K serve per degradare le proteine.
L'NaCl dipende dove è messo nel protocollo, potrebbe servire per far precipitare il DNA. In genere viene aggiunto all'etanolo.
Però con solo i reagenti e le soluzioni così senza una localizzazione precisa nel protocollo è più difficile dare un significato.
Altre informazioni più specifiche le trovi in altre discussioni, ad es. questa: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=5177 |
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LITHMI
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 31 gennaio 2010 : 12:25:49
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| ok grazie..i reagenti sono in ordine come nel protocollo, non ho scritto le centrifugate nel mezzo. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 01 febbraio 2010 : 12:40:32
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Citazione:
Messaggio inserito da LITHMI
ok grazie..i reagenti sono in ordine come nel protocollo, non ho scritto le centrifugate nel mezzo.
Ok ma non sono importanti solo i reagenti ma anche il protocollo stesso, i reagenti messi così ad elenco non hanno senso.
Ad esempio l'NaCl probabilmente lo usi assieme all'etanolo, ma questo non l'hai scritto, quindi diventa più difficile dirti a cosa servono, centrifugate a parte. |
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