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Soshi Fujiwara
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 Inserito il - 30 gennaio 2010 : 10:32:52
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Vorrei avere un vostro parere riguardo ad un esperimento che sto portando avanti in lab e che mi da diversi problemi.
Sto cercando di sequenziare una porzione di DNA adiacente ad un locus noto in L.Lactuca tramite iPCR, ma ottengo sempre bande multiple dopo aver effettuato l'amplificazione. Non posso aumentare troppo la stringenza perchè il sito su cui sono costruiti i primers è molto ricca di A e T e quindi non supero i 57°C (che cmq mi sembra sufficiente).
Il frammento è trascritto, ma non tradotto per cui neanche 3'RACE su cDNA può andare bene.
Idee su come procedere? Altre tecniche da suggerire o protocolli sicuramente efficaci? Vi prego senza l'uso di adattatori perchè proprio non riesco ad andarci d'accordo!
Grazie!!
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