estrazione metaboliti idrosolubili da extr cellula

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Autore

Discussione

morgan79
Utente Junior

Prov.: Bari

143 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2010 : 15:30:18

Dovrei eseguire dei test enzimatici su metaboliti idrosolubili estratti da omogenato cellulare. ho provato una estrazione fenolo-cloroformio; Pur essendo stato molto attento, mi son portato dietro un p� di fenolo che ha disattivato l'enzima in fase di dosaggio. quello che sospetto � che ci sia qualcosa che non va nella procedura che ho utilizzato, per cui ve la mostro:
ho sonicato le cellule risospese in un buffer dopodich� ho centrifugato 10 min a 1000 rcf per pellettare le cellule.
ad un volume di 900 ul di estratto sono stati aggiunti 400 ul di miscela fenolo cloroformio 1/1, ho agitato e ho centrifugato 3 minuti a 5000 rcf. il sovranatante contenente i metaboliti acquosi � stato separato e utilizzato per i dosaggi.
quelo che temo io � che 3 minuti non sono suffcienti per la separazione della fase organica e acquosa.
si accettano suggerimenti

il sapere non � sufficiente, bisogna applicare; il volere non � sufficiente, bisogna fare