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là
Utente Junior
565 Messaggi |
 Inserito il - 14 aprile 2010 : 19:11:48
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ciao a tutti! scusate, magari la domanda è scema.....se dopo un clonaggio mando il mio plasmide a sequenziare e continuo ad ottenere delle mutazioni puntiformi nella sequenza, quale può essere la causa?
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Laracroftit
Nuovo Arrivato
Città: Sassari
37 Messaggi |
Inserito il - 14 aprile 2010 : 19:15:41
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E' appena successo anche a me... Quando hai fatto la PCR per il frammento da clonare, quanti cicli hai fatto? perche' piu' cicli fai e maggiore e' la probabilita' di avere errori.
E un'altra cosa importante e' la Taq che hai utilizzato. Di solito per clonaggi uso la Pfx,ma dipende comunque da cosa stai facendo... |
"I want to know God's thoughts...
...the rest are details."
(Albert Einstein) |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 14 aprile 2010 : 20:24:38
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| Io ti suggerirei di far sequenziare anche il plasmide da cui hai ottenuto il tuo costrutto (se per esempio hai richiesto il gene ad un altro lab) e confrontare la sequenza... A volte le variazioni di sequenza sono dovute a polimorfismi che puoi trovare nei database |
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là
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2010 : 10:37:54
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| grazie! il problema non l'ho avuto io, ma una mia amica. le chiederò le informazioni che mi avete suggerito! grazie mille! |
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Discussione |
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sequenziamento e mutazioni puntiformi
Didattica
