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Surmar
Nuovo Arrivato
Città: ROMA
3 Messaggi |
 Inserito il - 06 maggio 2010 : 11:03:59
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Sono una stud.di medicina e non ho la minima idea, per ovvii motivi,di come si effettui una misurazione della metilazione del dna.Qualcuno può illuminarmi? Grazie
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AndreaPicol
Nuovo Arrivato
14 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2010 : 19:57:27
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Premetto che ciò che scrivere deriva solo da mio studio personale e quindi non posso dare informazioni esaurienti e sicure.
Bisolfito PCR: il DNA di interesse viene prima trattato con bisolfito di sodio per convertire i residui di citosina ad uracile in singolo filamento, poi il DNA viene amplificato con primer specifici per queste zone metilate.
Tecnica MSP: sempre grazie alla PCR utilizzano un primer, chiamato U, che si appaia a zone di DNA non metilato; primers M che si legano a DNA metilato; primers W che legano tutto e sono utilizzati come controllo. Poi tutto viene analizzato in gel d'agarosio e si osservano bande in corrispondenza del primer utilizzato (m metilato e U non metilato). |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2010 : 20:57:41
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io ero rimasto al "vecchio" sistema dell'uso di enzimi di restrizione e isoschizomeri sensibili alla metilazione del DNA. Digerisci due campioni uguali del tuo DNA uno con un enzima, l'altro con quello sensibile alla metilazione, corri sul gel e fai un southern blot così dalle differenze che osservi ti ricavi lo stato di metilazione del tuo DNA.
Però ho dato un'occhiata sulla rete ed ho visto un paio di metodi interessanti. Uno sfrutta la liquid chromatography mass spectrometry però chiaramente è un metodo costoso perchè ti devi dotare di uno spettrometro di massa. Ti digerisci il tuo DNA a livello di singoli nucleotidi e poi lo analizzi con lo spettrometro.
Ho visto poi un metodo sviluppato dalla sigma e basato sulla ELISA. Sinceramente non so come funziona però ti fornisco il link http://www.genengnews.com/gen-articles/measurement-of-global-dna-methylation/2854/
Infine se guardi sulla rete di sicuro trovi anche altra roba ;) |
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Surmar
Nuovo Arrivato
Città: ROMA
3 Messaggi |
Inserito il - 09 maggio 2010 : 22:24:42
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Grazie ad entrambi.Ma secondo voi è possibile che con sostanze inquinanti aumenti la metilazione e, con essa, la possibilità di avere alterazione dell'espressione genica e modifiche anche dei microRNA |
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Eus
Nuovo Arrivato
Città: Modena - Matera
6 Messaggi |
Inserito il - 25 maggio 2010 : 14:27:35
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Guarda a mio modesto parere è probabile per via indiretta!Ti spiego: La metilazione del DNA è dovuta alle DNA metiltransferasi ed ad altri numerosi fattori che compartecipano con esse come gli istoni modificati o il ripiegamento della cromatina.
Inquinanti cancerogeni sono appunto inquinanti che aumentano la probabilità di mutazione nel DNA e possono mutare direttamente geni per le metil transferasi o per i microRNA, o indirettamente mutando altri geni coinvolti nel processo della maetilazione portando quindi ad una ipometilazione della cromatina. Tutto ciò naturalmente produrrebbe delle mutazioni in poche cellule che probabilmente andrebbero in apoptosi o in normale necrosi proprio perchè alla fine non stiamo parlando di mutazioni in oncogeni, e quindi non sono tumori.
Ma se queste mutazioni avvengono nella linea germinale o in stadi precoci dell'embriogenesi (come nelle staminali embrionali) possono portare a mosaicismi.
Per parlare meno in generale e più sul tuo caso dovresti spiegarmi meglio a cosa ti riferisci.
Questa è la mia personale ipotesi formulata con i miei studi e quindi niente di attendibile ma spero di essere stato di aiuto lo stesso.
Ciao |
"Nulla si crea, nulla si distrugge ma tutto si trasforma!"
A. Einstein |
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biologonutrizionista
Nuovo Arrivato
25 Messaggi |
Inserito il - 25 giugno 2010 : 18:15:33
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| Non è qualcuno di buona volontà mi saprebbe indicare un link o spiegarmi il metodo del bisolfito per vedere CpG metilati??? grazieeee |
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Surmar
Nuovo Arrivato
Città: ROMA
3 Messaggi |
Inserito il - 21 luglio 2010 : 16:01:33
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Guardati questo lavoro:Curr Protoc Mol Biol. 2010 Jul;Chapter 7:Unit 7.9.1-17.
Bisulfite sequencing of DNA.
Darst RP, Pardo CE, Ai L, Brown KD, Kladde MP.
Ciao |
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metilazione del dna
Didattica
